ফ্লো সাইটোমেট্রির জন্য কোষগুলি কীভাবে ঠিক করবেন

ভূমিকা

আপনি কি কখনও বিস্মিত কিভাবে প্রবাহ সাইটোমেট্রি যেমন সুনির্দিষ্ট এবং নির্ভরযোগ্য কোষ বিশ্লেষণ অর্জন করে? সঠিক ফলাফলের চাবিকাঠি হল সঠিক কোষ স্থিরকরণের মধ্যে। ফ্লো সাইটোমেট্রি গবেষকদের আকার থেকে ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা পর্যন্ত বিভিন্ন ধরনের সেলুলার বৈশিষ্ট্য অধ্যয়ন করতে দেয়। যাইহোক, সঠিক স্থিরকরণ ছাড়া, ডেটা সত্যিকারের সেলুলার বৈশিষ্ট্যগুলি প্রতিফলিত করতে পারে না। এই নিবন্ধে, আমরা ফ্লো সাইটোমেট্রিতে সেল ফিক্সেশনের গুরুত্ব অন্বেষণ করব, বিভিন্ন ফিক্সেশন পদ্ধতি নিয়ে আলোচনা করব এবং সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য টিপস শেয়ার করব।

 

ফ্লো সাইটোমেট্রিতে সেল ফিক্সেশন কি?

সেল ফিক্সেশনের সংজ্ঞা

কোষ স্থিরকরণ এমন একটি প্রক্রিয়া যা কোষগুলিকে তাদের গঠন, কার্যকারিতা এবং আণবিক গঠনের পরিবর্তন রোধ করে স্থিতিশীল করে এবং সংরক্ষণ করে। এই প্রক্রিয়াটি রাসায়নিকভাবে ক্রস-লিঙ্কিং প্রোটিন, লিপিড এবং অন্যান্য সেলুলার উপাদানগুলির দ্বারা অর্জন করা হয়, কার্যকরভাবে কোষগুলিকে তাদের বর্তমান অবস্থায় 'হিমায়িত' করে। এটি প্রবাহ সাইটোমেট্রিতে বিশেষভাবে গুরুত্বপূর্ণ কারণ এটি বিশ্লেষণের সময় সেলুলার মার্কারগুলির অবক্ষয় বা সেলুলার কাঠামোর পরিবর্তন রোধ করে। কোষগুলিকে ঠিক করে, গবেষকরা নিশ্চিত করতে পারেন যে কোষগুলির বৈশিষ্ট্যগুলি সামঞ্জস্যপূর্ণ থাকে, যা প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণের সময় সুনির্দিষ্ট পরিমাপ এবং নির্ভরযোগ্য ডেটার জন্য অনুমতি দেয়।

কেন ফিক্সেশন গুরুত্বপূর্ণ

সঠিক স্থিরকরণ অপরিহার্য কারণ এটি সেলুলার প্রোটিন এবং নিউক্লিক অ্যাসিডের অখণ্ডতা বজায় রাখে, যা সঠিক প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণের জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। কোষ স্থির না হলে, তাদের গঠন এবং আণবিক মার্কার সময়ের সাথে সাথে ক্ষয় বা পরিবর্তন হতে পারে, যা অবিশ্বস্ত এবং ভুল ফলাফলের দিকে পরিচালিত করে। ফিক্সেশন মাল্টি-প্যারামিটার বিশ্লেষণের জন্য কোষগুলিকে স্থিতিশীল করার ক্ষেত্রে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে, যা প্রবাহ সাইটোমেট্রির অন্যতম প্রধান শক্তি। এটি গবেষকদের একযোগে একাধিক কোষের বৈশিষ্ট্য যেমন পৃষ্ঠ চিহ্নিতকারী, অন্তঃকোষীয় প্রোটিন এবং ডিএনএ বিষয়বস্তু একক পরীক্ষায় মূল্যায়ন করতে দেয়। সঠিক স্থিরকরণ ছাড়া, প্রাপ্ত ডেটা অসঙ্গত বা অসম্পূর্ণ হতে পারে, যা পরীক্ষামূলক ফলাফলের ভুল ব্যাখ্যার দিকে পরিচালিত করে।

 

ফ্লো সাইটোমেট্রির জন্য ফিক্সেশন পদ্ধতির ধরন

প্যারাফর্মালডিহাইড (পিএফএ) ফিক্সেশন

প্যারাফর্মালডিহাইড (পিএফএ) হল ফ্লো সাইটোমেট্রিতে সর্বাধিক ব্যবহৃত ফিক্সেটিভগুলির মধ্যে একটি, প্রাথমিকভাবে কোষের আকারবিদ্যা এবং অ্যান্টিজেনিসিটি সংরক্ষণে এর কার্যকারিতার কারণে। এটি কোষের মধ্যে ক্রস-লিংক প্রোটিন দ্বারা কাজ করে, নিশ্চিত করে যে সেলুলার গঠন এবং পৃষ্ঠের প্রোটিন উভয়ই অক্ষত থাকে। এটি কোষের পৃষ্ঠ চিহ্নিতকারী সংরক্ষণের জন্য পিএফএকে একটি চমৎকার পছন্দ করে তোলে, বিশেষ করে যখন ইমিউনোফেনোটাইপিং পরীক্ষায় পৃষ্ঠের প্রোটিন অভিব্যক্তি বিশ্লেষণ করে।

সুপারিশ:

● ঘনত্ব: 2-4% PFA সাধারণত সর্বোত্তম স্থিরকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়।

● ফিক্সেশনের সময়: কোষগুলিকে 2-8 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 15-30 মিনিটের জন্য পিএফএ-তে ইনকিউব করা উচিত।

● সঞ্চয়স্থান: ফিক্সেশনের পরে, স্বল্পমেয়াদী স্টোরেজের জন্য কোষগুলিকে 2-8°C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা উচিত। বর্ধিত সময়ের জন্য নির্দিষ্ট কোষ সংরক্ষণ না করা গুরুত্বপূর্ণ, কারণ এটি মার্কার অখণ্ডতা হারাতে পারে।

ওভার-ফিক্সেশন এড়ানো গুরুত্বপূর্ণ, কারণ পিএফএ-তে দীর্ঘায়িত এক্সপোজার সেলুলার অটোফ্লোরেসেন্সের দিকে পরিচালিত করতে পারে এবং পরবর্তী স্টেনিং এবং বিশ্লেষণে হস্তক্ষেপ করতে পারে। ফিক্সেশনের জন্য সর্বদা ন্যূনতম প্রয়োজনীয় সময় ব্যবহার করুন।

ইথানল ফিক্সেশন

ইথানল ফিক্সেশন সাধারণত ব্যবহৃত হয় যখন বিশ্লেষণের ফোকাস ডিএনএ বিষয়বস্তুর উপর থাকে, যেমন কোষ চক্র গবেষণায়। ইথানল একটি ডিহাইড্রেটিং এজেন্ট যা কোষের ঝিল্লি ভেদ করে এবং কোষের মধ্যে ডিএনএ সংরক্ষণ করে কাজ করে। এটি ইথানল ফিক্সেশনকে বিশেষ করে ডিএনএ-ভিত্তিক অ্যাসেস এবং প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণের জন্য উপযোগী করে তোলে যেখানে কোষ চক্রের পর্যায় বা ডিএনএ বিষয়বস্তু পরীক্ষা করা হচ্ছে।

সুপারিশ:

● ঘনত্ব: সাধারণত, 70-100% ইথানল ব্যবহার করা হয়।

● ফিক্সেশন টাইম: ইথানল ফিক্সেশনের জন্য সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য সাধারণত 10-15 মিনিটের প্রয়োজন হয়।

ইথানল ফিক্সেশন কোষ চক্রের পর্যায়গুলি সংরক্ষণের জন্য আদর্শ, এবং এটি কোষ চক্র বিশ্লেষণের জন্য প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড (পিআই) এর মতো ডিএনএ-বাইন্ডিং রঞ্জকগুলির সাথে সংমিশ্রণে ব্যবহার করা যেতে পারে।

মিথানল ফিক্সেশন

মিথানল হল আরেকটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত ফিক্সেটিভ, বিশেষ করে অন্তঃকোষীয় বিশ্লেষণের জন্য। এটি কোষের ঝিল্লি ভেদ করে এবং কোষের অভ্যন্তরীণ কাঠামোকে স্থিতিশীল করে কাজ করে। যদিও মিথানল সেলুলার প্রোটিন এবং অ্যান্টিজেন সংরক্ষণে কার্যকর, এটি কোষের সংকোচন ঘটাতে পারে, যা কোষের আকার এবং রূপবিদ্যার মতো নির্দিষ্ট বৈশিষ্ট্যগুলির ব্যাখ্যাকে প্রভাবিত করতে পারে।

সুপারিশ:

● ঘনত্ব: সাধারণত, 90-100% মিথানল ব্যবহার করা হয়।

● ফিক্সেশন সময়: 10-15 মিনিট সাধারণত যথেষ্ট।

আন্তঃকোষীয় প্রোটিন অধ্যয়ন করার সময়, বিশেষত সাইটোপ্লাজম বা নিউক্লিয়াসের ভিতরে চিহ্নিতকারী পরীক্ষা করার সময় প্রায়ই মিথানল ফিক্সেশন ব্যবহার করা হয়। যাইহোক, গবেষকদের মেথানল ফিক্সেশন ব্যবহার করার সময় কোষের সংকোচনের সম্ভাবনা বিবেচনা করা উচিত।

অন্যান্য ফিক্সেটিভ (যেমন, ফরমালিন)

ফরমালিন, জলে ফর্মালডিহাইডের একটি দ্রবণ, প্রবাহ সাইটোমেট্রিতে ব্যবহৃত আরেকটি ফিক্সেটিভ, যদিও এটি PFA-এর তুলনায় কম সাধারণ। ফরমালিন হিস্টোলজি এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রিতে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়, যেখানে এটি মাইক্রোস্কোপিক বিশ্লেষণের জন্য টিস্যু নমুনাগুলি কার্যকরভাবে সংরক্ষণ করে। যদিও ফরমালিন কোষের গঠন সংরক্ষণ করতে পারে, তবে এটি সাধারণত ফ্লো সাইটোমেট্রির জন্য সুপারিশ করা হয় না যদি না নির্দিষ্ট টিস্যু নমুনাগুলির সাথে কাজ করা হয়, কারণ এটি কোষের সাজানো এবং কিছু প্রতিপ্রভ প্রয়োগে হস্তক্ষেপ করতে পারে। ফরমালিন ফিক্সেশন টিস্যু নমুনার জন্য সবচেয়ে উপযুক্ত, পৃথক কোষের জন্য নয়।

 

স্থিরকারী	একাগ্রতা	ফিক্সেশন সময়	প্রস্তাবিত ব্যবহার
প্যারাফর্মালডিহাইড (PFA)	2-4%	15-30 মিনিট	সেল পৃষ্ঠ চিহ্নিতকারী সংরক্ষণের জন্য আদর্শ; ইমিউনোফেনোটাইপিংয়ের জন্য সাধারণ
ইথানল	70-100%	10-15 মিনিট	ডিএনএ বিষয়বস্তু বিশ্লেষণ এবং কোষ চক্র গবেষণার জন্য সেরা
মিথানল	90-100%	10-15 মিনিট	অন্তঃকোষীয় প্রোটিন বিশ্লেষণের জন্য উপযুক্ত; কোষ সঙ্কুচিত হতে পারে
ফরমালিন	10% (ফরমালডিহাইড)	পরিবর্তিত হয় (টিস্যুর উপর নির্ভর করে)	সাধারণত স্থির টিস্যু নমুনার জন্য ব্যবহৃত হয়, পৃথক কোষের জন্য নয়

 

ফ্লো সাইটোমেট্রির জন্য কোষ ঠিক করার জন্য ধাপে ধাপে নির্দেশিকা

কোষের নমুনা প্রস্তুত করা হচ্ছে

স্থির করার আগে, টিস্যু বা রক্তের নমুনা থেকে কোষগুলিকে আলাদা করা অপরিহার্য। সেন্ট্রিফিউগেশন হল সাসপেনশনে কোষকে কেন্দ্রীভূত করার জন্য ব্যবহৃত সবচেয়ে সাধারণ পদ্ধতি। যেকোন কালচার মিডিয়া বা অবশিষ্ট দূষক অপসারণের জন্য কোষগুলিকে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে ধোয়াও গুরুত্বপূর্ণ, যা ফিক্সেশন প্রক্রিয়াতে হস্তক্ষেপ করতে পারে।

 

1. কোষ বিচ্ছিন্নতা: আগ্রহের কোষগুলিকে আলাদা করতে সেন্ট্রিফিউগেশন বা সেল সাজানোর মতো স্ট্যান্ডার্ড আইসোলেশন পদ্ধতি ব্যবহার করুন।

2. ধোয়া: ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন (PBS) দিয়ে কোষগুলিকে ধোয়ার জন্য অবশিষ্ট মিডিয়া এবং দূষিত পদার্থগুলিকে অপসারণ করুন যা ফিক্সেশন প্রক্রিয়াকে প্রভাবিত করতে পারে।

ফিক্সেশন পদ্ধতি

একবার কোষগুলি প্রস্তুত হয়ে গেলে, পরবর্তী পদক্ষেপটি হল সেল সাসপেনশনে ফিক্সেটিভ যুক্ত করা। ফ্লো সাইটোমেট্রির জন্য সর্বাধিক ব্যবহৃত ফিক্সেটিভ হল 2-4% PFA সমাধান।

1. সেল সাসপেনশনে ফিক্সেটিভ যোগ করুন, এটি ভালভাবে মিশ্রিত হয়েছে তা নিশ্চিত করুন।

2. 2-8 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 15-30 মিনিটের জন্য ফিক্সেটিভ দিয়ে কোষগুলিকে ইনকিউবেট করুন।

3. ইনকিউবেশনের পরে, অতিরিক্ত ফিক্সেটিভ অপসারণ করতে পিবিএস দিয়ে কোষগুলিকে দুবার ধুয়ে ফেলুন।

পোস্ট-ফিক্সেশন ধাপ

স্থির করার পরে, কোষগুলিকে সাবধানে পরিচালনা করতে হবে। আরও বিশ্লেষণের প্রয়োজন হলে, বিশ্লেষণের আগে কোষগুলিকে দাগ দেওয়া উচিত। আপনি যদি ভবিষ্যতের বিশ্লেষণের জন্য কোষগুলি সংরক্ষণ করার পরিকল্পনা করেন, তবে তাদের একটি উপযুক্ত বাফারে পুনরায় সাসপেন্ড করুন এবং 2-8 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করুন। দীর্ঘ সময়ের জন্য ফিক্সেটিভের মধ্যে কোষগুলি রেখে যাওয়া এড়িয়ে চলুন, কারণ অতিরিক্ত ফিক্সেশন অটোফ্লোরেসেন্স বৃদ্ধি এবং সংকেতের গুণমান হ্রাস করতে পারে।

 

ফ্লো সাইটোমেট্রিতে সর্বোত্তম ফিক্সেশনের জন্য টিপস

ওভার-ফিক্সেশন এড়িয়ে চলা

ওভার-ফিক্সেশন ঘটে যখন কোষগুলি খুব বেশি সময় ধরে ফিক্সেটিভের সংস্পর্শে থাকে, যার ফলে সেলুলার প্রোটিনের অত্যধিক ক্রস-লিঙ্কিং হতে পারে এবং ডেটার গুণমানে আপস করতে পারে। এটি অটোফ্লোরোসেন্স, অ্যান্টিবডি বাইন্ডিং হ্রাস, এবং ভুল প্রবাহ সাইটোমেট্রি পরিমাপের দিকে পরিচালিত করতে পারে৷ সর্বদা আপনার নির্দিষ্ট কোষের ধরণের জন্য প্রস্তাবিত ফিক্সেশন সময় পরীক্ষা করুন এবং অতিরিক্ত ফিক্সেশন এড়াতে পরীক্ষা করুন৷

ফিক্সেশন টাইম বনাম নমুনার ধরন

সর্বোত্তম ফিক্সেশন সময় কোষের ধরন এবং পরীক্ষার প্রকৃতির উপর নির্ভর করে পরিবর্তিত হতে পারে। উদাহরণস্বরূপ, টিস্যু নমুনার তুলনায় ইমিউন কোষগুলির সংক্ষিপ্ত স্থির সময় প্রয়োজন হতে পারে। নমুনা প্রকারের নির্দিষ্ট চাহিদার উপর ভিত্তি করে ফিক্সেশন সময় সামঞ্জস্য করুন। পৃষ্ঠ প্রোটিন বিশ্লেষণের জন্য, একটি সংক্ষিপ্ত ফিক্সেশন সময় (10-15 মিনিট) সাধারণত যথেষ্ট। ইন্ট্রাসেলুলার স্টেনিং বা ডিএনএ বিশ্লেষণের জন্য, একটি দীর্ঘ স্থির সময় প্রয়োজন হতে পারে।

ফিক্সেশন পরে স্টেনিং

কোষগুলিকে ঠিক করার পরে, অ্যান্টিবডি বা ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক দিয়ে দাগ দেওয়া প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণের একটি গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপ। কিছু ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক, বিশেষ করে টেন্ডেম রঞ্জক, ফিক্সেশনের জন্য সংবেদনশীল হতে পারে এবং কোষগুলি অতিরিক্ত স্থির থাকলে তা ক্ষয় হতে পারে৷ সর্বোত্তম দাগের ফলাফলের জন্য, যখনই সম্ভব স্থির করার আগে কোষগুলিকে দাগ দেওয়ার পরামর্শ দেওয়া হয়৷ এটি রঞ্জক ক্ষয় রোধ করতে এবং শক্তিশালী ফ্লুরোসেন্স সংকেত নিশ্চিত করতে সহায়তা করতে পারে।

 

ফ্লো সাইটোমেট্রির জন্য স্থির কোষ সংরক্ষণ করা

স্বল্পমেয়াদী স্টোরেজ

স্বল্পমেয়াদী স্টোরেজের জন্য, স্থির কোষগুলিকে 2-8°C তাপমাত্রায় রেফ্রিজারেটরে সংরক্ষণ করা যেতে পারে। এটি আদর্শ যখন আপনি ফিক্সেশনের পরে এক বা দুই দিনের মধ্যে কোষগুলি বিশ্লেষণ করার পরিকল্পনা করেন। ফটোব্লিচিং প্রতিরোধ করার জন্য সর্বদা স্থির কোষগুলিকে অন্ধকারে সংরক্ষণ করুন, যা ফ্লুরোসেন্ট সংকেতকে প্রভাবিত করতে পারে।

দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজ

দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য, কোষগুলিকে ক্রিওপ্রিজারভেশন মিডিয়াতে হিমায়িত করা যেতে পারে। একটি সাধারণ ক্রিওপ্রিজারভেশন মাধ্যম 10% ডাইমিথাইল সালফক্সাইড (DMSO) এবং 90% ভ্রূণ বোভাইন সিরাম (FBS) নিয়ে গঠিত। যাইহোক, mFreSR™ বা CryoStor™ CS10 এর মতো সিরাম-মুক্ত ক্রিওপ্রিজারভেশন সমাধানগুলিও উপলব্ধ এবং FBS এর সাথে সম্পর্কিত সমস্যাগুলি এড়াতে ব্যবহার করা যেতে পারে৷ বরফের স্ফটিক গঠন প্রতিরোধ করতে, কোষগুলিকে হিমায়িত করতে একটি নিয়ন্ত্রিত-রেট ফ্রিজার ব্যবহার করুন৷ এটি কোষের কার্যক্ষমতা বজায় রাখতে সাহায্য করে এবং সঠিক স্টোরেজ নিশ্চিত করে।

 

ফ্লো সাইটোমেট্রির জন্য সেল ফিক্সেশন এড়ানোর জন্য সাধারণ ক্ষতি

অনুপযুক্ত স্থিরকরণের প্রভাব

অনুপযুক্ত ফিক্সেশন অটোফ্লোরেসেন্স, অ্যান্টিবডি বাইন্ডিং হ্রাস এবং দুর্বল কোষের কার্যকারিতা সহ বেশ কয়েকটি সমস্যার কারণ হতে পারে। এই সমস্যাগুলি প্রবাহ সাইটোমেট্রি ফলাফলের নির্ভুলতা এবং নির্ভরযোগ্যতাকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করতে পারে। আপনার নির্দিষ্ট নমুনার প্রকারের জন্য সর্বদা ফিক্সেশন প্রোটোকল যাচাই করুন, এবং নিশ্চিত করুন যে ফিক্সেশন শর্তগুলি কোষের ধরন এবং মার্কারের বিশ্লেষণের জন্য উপযুক্ত।

আপনার আবেদনের জন্য সঠিক ফিক্সেটিভ নির্বাচন করা

আপনার ফ্লো সাইটোমেট্রি পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত ফিক্সেটিভ নির্বাচন করা নির্ভরযোগ্য এবং সঠিক ফলাফল পাওয়ার জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। বিভিন্ন fixatives বিভিন্ন অ্যাপ্লিকেশনের জন্য ভাল উপযুক্ত. উদাহরণস্বরূপ, PFA সাধারণত পৃষ্ঠ প্রোটিন বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়, যখন ইথানল DNA-ভিত্তিক অধ্যয়নের জন্য আদর্শ। পরীক্ষা শুরু করার আগে, আপনার নির্দিষ্ট প্রয়োগের জন্য সর্বোত্তম ফিক্সেটিভ গবেষণা করুন এবং সেই অনুযায়ী ফিক্সেশন প্রোটোকল সামঞ্জস্য করুন।

 

উপসংহার

সফল প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ অর্জনের জন্য সঠিক সেল ফিক্সেশন অপরিহার্য। এটি সেলুলার কাঠামো সংরক্ষণ করতে সাহায্য করে এবং প্রোটিন এবং ডিএনএর অখণ্ডতা নিশ্চিত করে। সঠিক ফিক্সেশন প্রোটোকল অনুসরণ করে এবং ওভার-ফিক্সেশন এড়িয়ে, গবেষকরা ডেটার নির্ভুলতা এবং নির্ভরযোগ্যতা বাড়াতে পারেন। আপনার পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত ফিক্সেটিভ নির্বাচন করা আপনার ফলাফলের সামগ্রিক গুণমানকে উন্নত করে। এই সর্বোত্তম অনুশীলনগুলি প্রয়োগ করা নিশ্চিত করে যে আপনার প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ সেলুলার ফাংশনগুলির মধ্যে সামঞ্জস্যপূর্ণ, পুনরুত্পাদনযোগ্য অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করে৷

 

সঠিক কোষ স্থিরকরণ ফ্লো সাইটোমেট্রি এবং পণ্যগুলির মধ্যে একটি মূল ভূমিকা পালন করে HKeybio নির্ভরযোগ্য সমাধান অফার করে। তাদের অফারগুলি উচ্চ-মানের ফলাফল নিশ্চিত করে এবং সঠিক কোষ বিশ্লেষণের জন্য বিশ্বব্যাপী গবেষকদের দ্বারা বিশ্বস্ত।

 

FAQ

প্রশ্ন: প্রবাহ সাইটোমেট্রিতে কোষের স্থিরকরণের গুরুত্ব কী?

উত্তর: প্রবাহ সাইটোমেট্রিতে সেল ফিক্সেশন অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ কারণ এটি সেলুলার কাঠামো সংরক্ষণ করে এবং সঠিক বিশ্লেষণের জন্য প্রোটিন এবং ডিএনএ-এর অখণ্ডতা নিশ্চিত করে।

প্রশ্ন: প্রবাহ সাইটোমেট্রির জন্য কতক্ষণ কোষ স্থির করা উচিত?

উত্তর: কোষগুলিকে সাধারণত 15-30 মিনিটের জন্য 2-4% প্যারাফর্মালডিহাইড (PFA) দ্রবণ দিয়ে সেলুলার অখণ্ডতা বজায় রাখতে হবে৷

প্রশ্নঃ আমি কি ফ্লো সাইটোমেট্রিতে সেল ফিক্সেশনের জন্য ইথানল ব্যবহার করতে পারি?

উত্তর: হ্যাঁ, ইথানল ফিক্সেশন সাধারণত ফ্লো সাইটোমেট্রিতে ডিএনএ বিষয়বস্তু বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়, বিশেষ করে কোষ চক্র গবেষণার জন্য।

প্রশ্ন: কোষগুলি প্রবাহ সাইটোমেট্রিতে অতিরিক্ত স্থির হলে কী হবে?

উত্তর: ওভার-ফিক্সেশন অত্যধিক ক্রস-লিঙ্কিং ঘটাতে পারে, যার ফলে অটোফ্লোরেসেন্স এবং দুর্বল অ্যান্টিবডি বাঁধাই হতে পারে, যা প্রবাহ সাইটোমেট্রি ফলাফলকে প্রভাবিত করতে পারে।