ແນະນຳ
ເຈົ້າເຄີຍສົງໄສບໍ່ວ່າແນວໃດ flow cytometry ບັນລຸການວິເຄາະເຊນທີ່ຊັດເຈນແລະເຊື່ອຖືໄດ້? ກຸນແຈສໍາລັບຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຖືກຕ້ອງແມ່ນຢູ່ໃນການແກ້ໄຂເຊນທີ່ເຫມາະສົມ. Flow cytometry ອະນຸຍາດໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າເພື່ອສຶກສາຄວາມຫຼາກຫຼາຍຂອງລັກສະນະຂອງໂທລະສັບມືຖື, ຈາກຂະຫນາດເພື່ອຄວາມເຂັ້ມແຂງ fluorescence. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໂດຍບໍ່ມີການແກ້ໄຂທີ່ເຫມາະສົມ, ຂໍ້ມູນອາດຈະບໍ່ສະທ້ອນເຖິງຄຸນສົມບັດໂທລະສັບມືຖືທີ່ແທ້ຈິງ. ໃນບົດຄວາມນີ້, ພວກເຮົາຈະຄົ້ນຫາຄວາມສໍາຄັນຂອງການແກ້ໄຂເຊນໃນ cytometry ໄຫຼ, ປຶກສາຫາລືວິທີການ fixation ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ແລະແບ່ງປັນຄໍາແນະນໍາສໍາລັບຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີທີ່ສຸດ.
ການສ້ອມແຊມເຊລໃນ Flow Cytometry ແມ່ນຫຍັງ?
ຄໍານິຍາມຂອງການແກ້ໄຂເຊນ
ການສ້ອມແຊມຈຸລັງແມ່ນຂະບວນການທີ່ສະຖຽນລະພາບແລະຮັກສາຈຸລັງໂດຍການປ້ອງກັນການປ່ຽນແປງໃນໂຄງສ້າງ, ຫນ້າທີ່ແລະອົງປະກອບໂມເລກຸນຂອງມັນ. ຂະບວນການນີ້ແມ່ນບັນລຸໄດ້ໂດຍທາດໂປຼຕີນຈາກການເຊື່ອມໂຍງທາງເຄມີ, lipids, ແລະອົງປະກອບຂອງຈຸລັງອື່ນໆ, ປະສິດທິຜົນ 'freezing' ຈຸລັງໃນສະຖານະປະຈຸບັນຂອງເຂົາເຈົ້າ. ນີ້ແມ່ນສິ່ງສໍາຄັນໂດຍສະເພາະໃນ cytometry ການໄຫຼເນື່ອງຈາກວ່າມັນປ້ອງກັນການເຊື່ອມໂຊມຂອງເຄື່ອງຫມາຍໂທລະສັບມືຖືຫຼືການປ່ຽນແປງໂຄງສ້າງຂອງເຊນໃນລະຫວ່າງການວິເຄາະ. ໂດຍການແກ້ໄຂຈຸລັງ, ນັກຄົ້ນຄວ້າສາມາດຮັບປະກັນວ່າຄຸນລັກສະນະຂອງຈຸລັງຍັງຄົງສອດຄ່ອງ, ເຊິ່ງອະນຸຍາດໃຫ້ມີການວັດແທກທີ່ຊັດເຈນແລະຂໍ້ມູນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ໃນລະຫວ່າງການວິເຄາະ cytometry ການໄຫຼ.
ເປັນຫຍັງການແກ້ໄຂຈຶ່ງສໍາຄັນ
ການສ້ອມແຊມທີ່ເຫມາະສົມແມ່ນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນເພາະວ່າມັນຮັກສາຄວາມສົມບູນຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກຈຸລັງແລະອາຊິດນິວເຄຼຍ, ເຊິ່ງເປັນສິ່ງສໍາຄັນສໍາລັບການວິເຄາະ cytometry ການໄຫຼທີ່ຖືກຕ້ອງ. ຖ້າຈຸລັງບໍ່ໄດ້ຮັບການສ້ອມແຊມ, ໂຄງສ້າງແລະໂມເລກຸນຂອງພວກມັນອາດຈະຊຸດໂຊມຫຼືປ່ຽນແປງຕາມເວລາ, ນໍາໄປສູ່ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຫນ້າເຊື່ອຖືແລະບໍ່ຖືກຕ້ອງ. Fixation ຍັງມີບົດບາດສໍາຄັນໃນການຮັກສາສະຖຽນລະພາບຂອງເຊນສໍາລັບການວິເຄາະຫຼາຍພາລາມິເຕີ, ເຊິ່ງເປັນຫນຶ່ງໃນຄວາມເຂັ້ມແຂງທີ່ສໍາຄັນຂອງ cytometry ການໄຫຼ. ມັນຊ່ວຍໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າສາມາດປະເມີນລັກສະນະຕ່າງໆຂອງເຊນໄດ້ພ້ອມກັນ, ເຊັ່ນ: ເຄື່ອງໝາຍພື້ນຜິວ, ໂປຣຕີນພາຍໃນເຊນ, ແລະເນື້ອໃນຂອງ DNA, ໃນການທົດລອງຄັ້ງດຽວ. ໂດຍບໍ່ມີການແກ້ໄຂທີ່ເຫມາະສົມ, ຂໍ້ມູນທີ່ໄດ້ຮັບອາດບໍ່ສອດຄ່ອງຫຼືບໍ່ຄົບຖ້ວນ, ນໍາໄປສູ່ການຕີຄວາມຫມາຍທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຂອງຜົນການທົດລອງ.
ປະເພດຂອງວິທີການແກ້ໄຂສໍາລັບການໄຫຼ Cytometry
ການສ້ອມແຊມ Paraformaldehyde (PFA).
Paraformaldehyde (PFA) ແມ່ນຫນຶ່ງໃນການແກ້ໄຂທີ່ໃຊ້ກັນຢ່າງກວ້າງຂວາງທີ່ສຸດໃນ cytometry ໄຫຼ, ຕົ້ນຕໍແມ່ນຍ້ອນປະສິດທິພາບໃນການຮັກສາ morphology ຂອງເຊນແລະ antigenicity. ມັນເຮັດວຽກໂດຍການເຊື່ອມໂຍງລະຫວ່າງທາດໂປຼຕີນພາຍໃນຈຸລັງ, ຮັບປະກັນວ່າທັງໂຄງສ້າງຂອງເຊນແລະທາດໂປຼຕີນຈາກຫນ້າດິນຍັງຄົງ intact. ນີ້ເຮັດໃຫ້ PFA ເປັນທາງເລືອກທີ່ດີເລີດສໍາລັບການເກັບຮັກສາເຄື່ອງຫມາຍພື້ນຜິວຂອງເຊນ, ໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ການວິເຄາະການສະແດງອອກຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກຫນ້າດິນໃນການທົດລອງ immunophenotyping.
ຄຳແນະນຳ:
● ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: 2-4% PFA ຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປສໍາລັບການສ້ອມແຊມທີ່ດີທີ່ສຸດ.
● ເວລາການສ້ອມແຊມ: ຄວນອົບເຊລໃນ PFA ປະມານ 15-30 ນາທີທີ່ອຸນຫະພູມ 2-8 ອົງສາ.
● ການເກັບຮັກສາ: ຫຼັງຈາກການສ້ອມແຊມ, ເຊລຄວນຈະຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 2-8 ° C ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໄລຍະສັ້ນ. ມັນເປັນສິ່ງສໍາຄັນທີ່ຈະບໍ່ເກັບຮັກສາຈຸລັງຄົງທີ່ສໍາລັບໄລຍະເວລາທີ່ຍາວນານ, ເພາະວ່ານີ້ອາດຈະເຮັດໃຫ້ການສູນເສຍຄວາມສົມບູນຂອງເຄື່ອງຫມາຍ.
ມັນເປັນສິ່ງສໍາຄັນທີ່ຈະຫຼີກເວັ້ນການແກ້ໄຂຫຼາຍເກີນໄປ, ຍ້ອນວ່າການເປີດເຜີຍ PFA ດົນນານສາມາດນໍາໄປສູ່ການ autofluorescence ຂອງເຊນແລະແຊກແຊງການ staining ຕໍ່ມາແລະການວິເຄາະ. ສະເຫມີໃຊ້ຈໍານວນເວລາທີ່ຕ້ອງການຫນ້ອຍທີ່ສຸດສໍາລັບການສ້ອມແຊມ.
ການສ້ອມແຊມເອທານອນ
ການສ້ອມແຊມເອທານອນຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍທົ່ວໄປໃນເວລາທີ່ຈຸດສຸມຂອງການວິເຄາະແມ່ນກ່ຽວກັບເນື້ອໃນ DNA, ເຊັ່ນໃນການສຶກສາວົງຈອນຂອງເຊນ. ເອທານອນແມ່ນຕົວແທນການລະບາຍນ້ໍາທີ່ເຮັດວຽກໂດຍການເຈາະເຍື່ອເຊນແລະຮັກສາ DNA ພາຍໃນຈຸລັງ. ນີ້ເຮັດໃຫ້ການແກ້ໄຂເອທານອນເປັນປະໂຫຍດໂດຍສະເພາະສໍາລັບການວິເຄາະໂດຍອີງໃສ່ DNA ແລະການວິເຄາະ cytometry ການໄຫຼເຂົ້າບ່ອນທີ່ຂັ້ນຕອນວົງຈອນຂອງເຊນຫຼືເນື້ອຫາ DNA ກໍາລັງຖືກກວດສອບ.
ຄຳແນະນຳ:
● ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ໂດຍປົກກະຕິ, 70-100% ethanol ແມ່ນໃຊ້.
● ເວລາການສ້ອມແຊມ: ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວການສ້ອມແຊມເອທານອນຕ້ອງການ 10-15 ນາທີເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຜົນທີ່ດີທີ່ສຸດ.
ການສ້ອມແຊມເອທານອນແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການຮັກສາໄລຍະວົງຈອນຂອງເຊນ, ແລະມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນການປະສົມປະສານກັບສີຍ້ອມ DNA ທີ່ຜູກມັດເຊັ່ນ propidium iodide (PI) ສໍາລັບການວິເຄາະວົງຈອນຂອງເຊນ.
ການສ້ອມແຊມ Methanol
Methanol ແມ່ນຢາແກ້ໄຂທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປອີກອັນຫນຶ່ງ, ໂດຍສະເພາະສໍາລັບການວິເຄາະພາຍໃນຈຸລັງ. ມັນເຮັດວຽກໂດຍການເຈາະເຍື່ອຈຸລັງແລະສະຖຽນລະພາບໂຄງສ້າງພາຍໃນຂອງເຊນ. ໃນຂະນະທີ່ methanol ມີປະສິດທິພາບໃນການຮັກສາໂປຣຕີນຂອງຈຸລັງແລະ antigens, ມັນສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການຫົດຕົວຂອງເຊນ, ເຊິ່ງອາດຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການຕີຄວາມຫມາຍຂອງລັກສະນະບາງຢ່າງເຊັ່ນ: ຂະຫນາດຂອງເຊນແລະ morphology.
ຄຳແນະນຳ:
● ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ໂດຍປົກກະຕິ, 90-100% methanol ແມ່ນໃຊ້.
●ເວລາແກ້ໄຂ: 10-15 ນາທີປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນພຽງພໍ.
ການສ້ອມແຊມ Methanol ມັກຈະຖືກໃຊ້ໃນເວລາທີ່ສຶກສາທາດໂປຼຕີນພາຍໃນຈຸລັງ, ໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ກວດເບິ່ງເຄື່ອງຫມາຍພາຍໃນ cytoplasm ຫຼື nucleus. ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ນັກຄົ້ນຄວ້າຄວນພິຈາລະນາທ່າແຮງສໍາລັບການຫົດຕົວຂອງເຊນໃນເວລາທີ່ໃຊ້ການແກ້ໄຂ methanol.
Fixatives ອື່ນໆ (ເຊັ່ນ: Formalin)
Formalin, ການແກ້ໄຂຂອງ formaldehyde ໃນນ້ໍາ, ເປັນ fixative ອື່ນທີ່ໃຊ້ໃນ cytometry ການໄຫຼ, ເຖິງແມ່ນວ່າມັນແມ່ນຫນ້ອຍກວ່າ PFA. Formalin ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນ histology ແລະ immunohistochemistry, ບ່ອນທີ່ມັນມີປະສິດທິພາບຮັກສາຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອສໍາລັບການວິເຄາະກ້ອງຈຸລະທັດ. ເຖິງແມ່ນວ່າ formalin ສາມາດຮັກສາໂຄງສ້າງຂອງເຊນໄດ້, ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວມັນບໍ່ໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ສໍາລັບ cytometry ໄຫຼ, ເວັ້ນເສຍແຕ່ວ່າເຮັດວຽກກັບຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອຄົງທີ່, ຍ້ອນວ່າມັນສາມາດລົບກວນການຈັດລຽງຂອງເຊນແລະບາງຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ fluorescence. ການສ້ອມແຊມ formalin ແມ່ນເຫມາະສົມທີ່ສຸດສໍາລັບຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອ, ບໍ່ແມ່ນສໍາລັບແຕ່ລະຈຸລັງ.
ແກ້ໄຂ |
ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ |
ເວລາແກ້ໄຂ |
ການນໍາໃຊ້ທີ່ແນະນໍາ |
Paraformaldehyde (PFA) |
2-4% |
15-30 ນາທີ |
ເຫມາະສໍາລັບການຮັກສາເຄື່ອງຫມາຍພື້ນຜິວຂອງເຊນ; ທົ່ວໄປສໍາລັບການ immunophenotyping |
ເອທານອນ |
70-100% |
10-15 ນາທີ |
ທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການວິເຄາະເນື້ອຫາ DNA ແລະການສຶກສາວົງຈອນຂອງເຊນ |
ເມທານອນ |
90-100% |
10-15 ນາທີ |
ເຫມາະສໍາລັບການວິເຄາະທາດໂປຼຕີນຈາກ intracellular; ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການຫົດຕົວຂອງເຊນ |
ຟໍມາລິນ |
10% (formaldehyde) |
ແຕກຕ່າງກັນ (ຂຶ້ນກັບເນື້ອເຍື່ອ) |
ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວໃຊ້ສໍາລັບຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອຄົງທີ່, ບໍ່ແມ່ນສໍາລັບແຕ່ລະຈຸລັງ |
ຄູ່ມືຂັ້ນຕອນໂດຍຂັ້ນຕອນການແກ້ໄຂຈຸລັງສໍາລັບການໄຫຼ Cytometry
ການກະກຽມຕົວຢ່າງຈຸລັງ
ກ່ອນທີ່ຈະແກ້ໄຂ, ມັນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນທີ່ຈະແຍກຈຸລັງອອກຈາກເນື້ອເຍື່ອຫຼືຕົວຢ່າງເລືອດ. Centrifugation ແມ່ນວິທີການທົ່ວໄປທີ່ສຸດທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການສຸມໃສ່ຈຸລັງຢູ່ໃນ suspension. ມັນຍັງມີຄວາມສໍາຄັນທີ່ຈະລ້າງຈຸລັງຢ່າງລະອຽດເພື່ອເອົາສື່ວັດທະນະທໍາຫຼືສິ່ງປົນເປື້ອນທີ່ຕົກຄ້າງ, ເຊິ່ງອາດຈະແຊກແຊງຂະບວນການແກ້ໄຂ.
1. ການແຍກເຊລ: ໃຊ້ວິທີການແຍກມາດຕະຖານເຊັ່ນ: ການແຍກເຊລ ຫຼື ການແຍກຈຸລັງເພື່ອແຍກຈຸລັງທີ່ສົນໃຈ.
2. ການລ້າງ: ລ້າງຈຸລັງດ້ວຍ phosphate-buffered saline (PBS) ເພື່ອເອົາສື່ທີ່ຕົກຄ້າງ ແລະສິ່ງປົນເປື້ອນທີ່ອາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຂະບວນການສ້ອມແຊມ.
ຂັ້ນຕອນການແກ້ໄຂ
ເມື່ອຈຸລັງຖືກກະກຽມ, ຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປແມ່ນການເພີ່ມ fixative ກັບ suspension ຈຸລັງ. ການແກ້ໄຂທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປທີ່ສຸດສໍາລັບການໄຫຼວຽນຂອງ cytometry ແມ່ນການແກ້ໄຂ PFA 2-4%.
1. ເພີ່ມ fixative ກັບ suspension ເຊນ, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າມັນປະສົມກັນດີ.
2. ຟອກເຊວດ້ວຍສານແກ້ໄຂປະມານ 15-30 ນາທີ ທີ່ອຸນຫະພູມ 2-8 ອົງສາ.
3. ຫຼັງຈາກ incubation, ລ້າງຈຸລັງສອງຄັ້ງດ້ວຍ PBS ເພື່ອເອົາ fixative ເກີນ.
ຂັ້ນຕອນຫຼັງການແກ້ໄຂ
ຫຼັງຈາກການແກ້ໄຂ, ຈຸລັງຕ້ອງໄດ້ຮັບການປະຕິບັດຢ່າງລະມັດລະວັງ. ຖ້າຕ້ອງການການວິເຄາະຕື່ມອີກ, ຈຸລັງຄວນໄດ້ຮັບການ stained ກ່ອນການວິເຄາະ. ຖ້າທ່ານວາງແຜນທີ່ຈະເກັບຮັກສາຈຸລັງສໍາລັບການວິເຄາະໃນອະນາຄົດ, ຢຸດພວກມັນຄືນໃຫມ່ໃນ buffer ທີ່ເຫມາະສົມແລະເກັບຮັກສາພວກມັນຢູ່ທີ່ 2-8 ° C. ຫຼີກເວັ້ນການປ່ອຍໃຫ້ຈຸລັງຢູ່ໃນ fixative ສໍາລັບເວລາດົນນານ, ເນື່ອງຈາກວ່າການແກ້ໄຂຫຼາຍເກີນໄປສາມາດນໍາໄປສູ່ການເພີ່ມ autofluorescence ແລະຄຸນນະພາບສັນຍານຫຼຸດລົງ.
ຄໍາແນະນໍາສໍາລັບການແກ້ໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດໃນ Flow Cytometry
ຫຼີກເວັ້ນການແກ້ໄຂຫຼາຍເກີນໄປ
over-fixation ເກີດຂຶ້ນເມື່ອຈຸລັງຖືກສໍາຜັດກັບ fixative ດົນເກີນໄປ, ຊຶ່ງສາມາດສົ່ງຜົນໃຫ້ການເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ cellular ຫຼາຍເກີນໄປແລະປະນີປະນອມຄຸນນະພາບຂອງຂໍ້ມູນ. ນີ້ສາມາດນໍາໄປສູ່ການ autofluorescence, ຫຼຸດລົງການຜູກມັດ antibody, ແລະການວັດແທກ cytometry ໄຫຼບໍ່ຖືກຕ້ອງ. ກວດເບິ່ງເວລາ fixation ທີ່ແນະນໍາສໍາລັບປະເພດເຊນສະເພາະຂອງທ່ານແລະການທົດລອງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການແກ້ໄຂຫຼາຍເກີນໄປ.
Fixation Time vs. ປະເພດຕົວຢ່າງ
ເວລາການແກ້ໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດອາດຈະແຕກຕ່າງກັນໄປຕາມປະເພດຂອງເຊນແລະລັກສະນະຂອງການທົດລອງ. ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, ຈຸລັງພູມຕ້ານທານອາດຈະຕ້ອງການເວລາ fixation ສັ້ນກວ່າຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອ. ປັບເວລາການແກ້ໄຂໂດຍອີງໃສ່ຄວາມຕ້ອງການສະເພາະຂອງປະເພດຕົວຢ່າງ. ສໍາລັບການວິເຄາະທາດໂປຼຕີນຈາກຫນ້າດິນ, ໄລຍະເວລາແກ້ໄຂສັ້ນກວ່າ (10-15 ນາທີ) ປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນພຽງພໍ. ສໍາລັບການ staining intracellular ຫຼືການວິເຄາະ DNA, ອາດຈະຈໍາເປັນຕ້ອງໃຊ້ເວລາ fixation ຍາວ.
ຮອຍດ່າງຫຼັງຈາກການແກ້ໄຂ
ຫຼັງຈາກການແກ້ໄຂຈຸລັງ, ການຍ້ອມສີດ້ວຍພູມຕ້ານທານຫຼືສີຍ້ອມ fluorescent ແມ່ນຂັ້ນຕອນທີ່ສໍາຄັນໃນການວິເຄາະ cytometry ການໄຫຼ. ສີຍ້ອມ fluorescent ບາງອັນ, ໂດຍສະເພາະສີຍ້ອມຜ້າ tandem, ສາມາດມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ການສ້ອມແຊມ ແລະ ອາດຈະຊຸດໂຊມໄດ້ຖ້າເຊລຖືກແກ້ໄຂເກີນໄປ. ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຜົນການຍ້ອມສີທີ່ດີທີ່ສຸດ, ແນະນຳໃຫ້ທາເຊລກ່ອນການສ້ອມແຊມທຸກຄັ້ງທີ່ເປັນໄປໄດ້. ອັນນີ້ສາມາດຊ່ວຍປ້ອງກັນການເສື່ອມສີຂອງສີຍ້ອມ ແລະຮັບປະກັນສັນຍານ fluorescence ທີ່ແຂງແຮງຂຶ້ນ.
ການເກັບຮັກສາຈຸລັງຄົງທີ່ສໍາລັບການໄຫຼ Cytometry
ການເກັບຮັກສາໄລຍະສັ້ນ
ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໄລຍະສັ້ນ, ຈຸລັງຄົງທີ່ສາມາດໄດ້ຮັບການເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຕູ້ເຢັນຢູ່ທີ່ 2-8 ° C. ນີ້ແມ່ນເຫມາະສົມທີ່ສຸດໃນເວລາທີ່ທ່ານວາງແຜນທີ່ຈະວິເຄາະຈຸລັງພາຍໃນຫນຶ່ງຫຼືສອງມື້ຫຼັງຈາກ fixation. ເກັບຮັກສາເຊລຄົງທີ່ຢູ່ໃນບ່ອນມືດສະເໝີເພື່ອປ້ອງກັນການຟອກຮູບ, ເຊິ່ງສາມາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ສັນຍານ fluorescent.
ການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວ
ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວ, ຈຸລັງສາມາດຖືກແຊ່ແຂໍງໄວ້ໃນສື່ການເກັບຮັກສາ cryopreservation. ມາດຕະຖານການເກັບຮັກສາ cryopreservation ປົກກະຕິປະກອບດ້ວຍ 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) ແລະ 90% fetal bovine serum (FBS). ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ວິທີແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາ cryopreservation ທີ່ບໍ່ມີ serum ເຊັ່ນ mFreSR™ ຫຼື CryoStor™ CS10 ຍັງມີຢູ່ ແລະສາມາດໃຊ້ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນບັນຫາທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ FBS. ເພື່ອປ້ອງກັນການສ້າງກ້ອນຫີນ, ໃຫ້ໃຊ້ຕູ້ແຊ່ແຂງທີ່ມີອັດຕາຄວບຄຸມເພື່ອແຊ່ຈຸລັງ. ນີ້ຊ່ວຍຮັກສາຄວາມມີຊີວິດຂອງເຊນແລະຮັບປະກັນການເກັບຮັກສາທີ່ເຫມາະສົມ.
ຂຸມທົ່ວໄປທີ່ຈະຫຼີກເວັ້ນໃນການແກ້ໄຂເຊນສໍາລັບການໄຫຼ Cytometry
ຜົນກະທົບຂອງການແກ້ໄຂທີ່ບໍ່ເຫມາະສົມ
ການສ້ອມແຊມທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງສາມາດນໍາໄປສູ່ບັນຫາຫຼາຍຢ່າງ, ລວມທັງ autofluorescence, ການຫຼຸດຜ່ອນການຜູກມັດຂອງພູມຕ້ານທານ, ແລະການມີຊີວິດຂອງເຊນບໍ່ດີ. ບັນຫາເຫຼົ່ານີ້ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍສາມາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືຂອງຜົນໄດ້ຮັບ cytometry ໄຫຼ. ສະເຫມີກວດສອບໂປໂຕຄອນການແກ້ໄຂສໍາລັບປະເພດຕົວຢ່າງສະເພາະຂອງທ່ານ, ແລະໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເງື່ອນໄຂການແກ້ໄຂແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບປະເພດເຊນແລະເຄື່ອງຫມາຍທີ່ຖືກວິເຄາະ.
ການເລືອກ Fixative ທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງທ່ານ
ການເລືອກຕົວແກ້ໄຂທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການທົດລອງ cytometry ໄຫຼຂອງທ່ານແມ່ນສໍາຄັນສໍາລັບການໄດ້ຮັບຜົນໄດ້ຮັບທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ແລະຖືກຕ້ອງ. fixatives ທີ່ແຕກຕ່າງກັນແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, PFA ຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປສໍາລັບການວິເຄາະທາດໂປຼຕີນຈາກພື້ນຜິວ, ໃນຂະນະທີ່ເອທານອນແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການສຶກສາ DNA. ກ່ອນທີ່ຈະເລີ່ມຕົ້ນການທົດລອງ, ການຄົ້ນຄວ້າການແກ້ໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກສະເພາະຂອງທ່ານແລະປັບຕົວກໍານົດການ fixation ຕາມຄວາມເຫມາະສົມ.
ສະຫຼຸບ
ການສ້ອມແຊມເຊລທີ່ເຫມາະສົມເປັນສິ່ງຈໍາເປັນສໍາລັບການບັນລຸການວິເຄາະ cytometry ການໄຫຼສົບຜົນສໍາເລັດ. ມັນຊ່ວຍຮັກສາໂຄງສ້າງຂອງເຊນແລະຮັບປະກັນຄວາມສົມບູນຂອງທາດໂປຼຕີນແລະ DNA. ໂດຍປະຕິບັດຕາມໂປໂຕຄອນການແກ້ໄຂທີ່ເຫມາະສົມແລະຫຼີກເວັ້ນການແກ້ໄຂຫຼາຍເກີນໄປ, ນັກຄົ້ນຄວ້າສາມາດເພີ່ມຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືຂອງຂໍ້ມູນ. ການເລືອກຕົວແກ້ໄຂທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການທົດລອງຂອງທ່ານປັບປຸງຄຸນນະພາບໂດຍລວມຂອງຜົນໄດ້ຮັບຂອງທ່ານ. ການປະຕິບັດການປະຕິບັດທີ່ດີທີ່ສຸດເຫຼົ່ານີ້ຮັບປະກັນວ່າການວິເຄາະ cytometry ການໄຫຼຂອງເຈົ້າສະຫນອງຄວາມເຂົ້າໃຈທີ່ສອດຄ່ອງ, ສາມາດແຜ່ພັນໄດ້ໃນຫນ້າທີ່ຂອງເຊນ.
ການສ້ອມແຊມຈຸລັງທີ່ເຫມາະສົມມີບົດບາດສໍາຄັນໃນ cytometry ໄຫຼ, ແລະຜະລິດຕະພັນຈາກ HKeybio ສະເຫນີການແກ້ໄຂທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້. ການສະເຫນີຂອງພວກເຂົາຮັບປະກັນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງແລະໄດ້ຮັບຄວາມໄວ້ວາງໃຈຈາກນັກຄົ້ນຄວ້າທົ່ວໂລກສໍາລັບການວິເຄາະຈຸລັງທີ່ຖືກຕ້ອງ.
FAQ
Q: ຄວາມສໍາຄັນຂອງການສ້ອມແຊມເຊນໃນ cytometry ໄຫຼແມ່ນຫຍັງ?
A: ການສ້ອມແຊມເຊລແມ່ນສໍາຄັນໃນ cytometry ໄຫຼຍ້ອນວ່າມັນຮັກສາໂຄງສ້າງຂອງເຊນແລະຮັບປະກັນຄວາມສົມບູນຂອງທາດໂປຼຕີນແລະ DNA ສໍາລັບການວິເຄາະທີ່ຖືກຕ້ອງ.
ຖາມ: ເຊັລຄວນຖືກແກ້ໄຂດົນປານໃດສໍາລັບ cytometry ໄຫຼ?
A: ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວຈຸລັງຄວນໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂສໍາລັບ 15-30 ນາທີດ້ວຍການແກ້ໄຂ 2-4% paraformaldehyde (PFA) ເພື່ອຮັກສາຄວາມສົມບູນຂອງເຊນ.
ຖາມ: ຂ້ອຍສາມາດໃຊ້ເອທານອນສໍາລັບການສ້ອມແຊມເຊນໃນ cytometry ໄຫຼໄດ້ບໍ?
A: ແມ່ນແລ້ວ, ການສ້ອມແຊມເອທານອນແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປສໍາລັບການວິເຄາະເນື້ອໃນ DNA ໃນ cytometry ການໄຫຼ, ໂດຍສະເພາະສໍາລັບການສຶກສາວົງຈອນຂອງເຊນ.
ຖາມ: ຈະເກີດຫຍັງຂຶ້ນຖ້າເຊລຖືກແກ້ໄຂຫຼາຍເກີນໄປໃນ cytometry ໄຫຼ?
A: over-fixation ສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການເຊື່ອມໂຍງຂ້າມຫຼາຍເກີນໄປ, ນໍາໄປສູ່ການ autofluorescence ແລະການຜູກມັດ antibody ທີ່ບໍ່ດີ, ເຊິ່ງອາດຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຜົນຂອງ flow cytometry.
