Kupu Whakataki
Kua whakaaro koe me pehea Ko te rere o te cytometry e tutuki ana i taua tātaritanga pūtau tino tika me te pono? Ko te mea nui ki nga hua tika ko te whakatika tika o nga pūtau. Ko te Flow cytometry e taea ai e nga kairangahau te ako i nga momo ahuatanga o te waea, mai i te rahi ki te kaha o te rewharewha. Heoi, ki te kore e tika te whakatika, kare pea nga raraunga e whakaatu i nga ahuatanga pūkoro pono. I roto i tenei tuhinga, ka tirotirohia e tatou te hiranga o te whakatikanga pūtau i roto i te cytometry rere, ka matapaki i nga tikanga whakatika rereke, me te tiri tohutohu mo nga hua tino pai.
He aha te Whakatikatika Pūtau i te Flow Cytometry?
Te Whakamaramatanga o te Whakatikatika Pūtau
Ko te whakatika pūtau he tukanga e whakapūmau ana, e pupuri ana i ngā pūtau mā te aukati i ngā rerekētanga o te hanganga, te mahi, me te hanganga rāpoi. Ka tutuki tenei tukanga ma te matū hono-whakawhitinga pūmua, ngongo, me etahi atu waahanga pūtau, e tika ana te 'whakamao' i nga pūtau i roto i te ahua o naianei. He mea nui tenei i roto i te cytometry rere na te mea ka aukati i te paheketanga o nga tohu pūkoro, te whakarereketanga ranei o nga hanganga pūkoro i te wa o te tātari. Ma te whakatika i nga pūtau, ka taea e nga kairangahau te whakarite kia rite tonu nga ahuatanga o nga pūtau, e taea ai te ine tika me nga raraunga pono i te wa o te tātari cytometry rere.
He aha te mea nui te whakatika
He mea nui te whakatika tika na te mea ka mau tonu te pono o nga pūmua pūtau me nga waikawa karihi, he mea tino nui mo te tātaritanga cytometry tika. Mēnā karekau ngā pūtau i whakaū, ka heke, ka huri rānei ō rātou hanganga me ngā tohu rāpoi i roto i te wā, ka puta he hua kore pono, hē. He mahi nui ano te whakatika ki te whakapumau i nga pūtau mo te tātari tawhā-maha, koinei tetahi o nga kaha matua o te cytometry rere. Ka taea e nga kairangahau te aromatawai i te wa kotahi i nga ahuatanga pūtau maha, penei i nga tohu mata, nga pūmua intracellular, me te ihirangi DNA, i roto i te whakamatautau kotahi. Ki te kore e whakatika tika, ka kore e rite, karekau ranei nga raraunga ka puta, ka pohehe i nga putanga whakamatautau.
Nga Momo Tikanga Whakatikatika mo te Rere Cytometry
Paraformaldehyde (PFA) Whakatikatika
Ko te Paraformaldehyde (PFA) tetahi o nga taputapu tino whakamahia i roto i te rerenga cytometry, na tona whai hua ki te tiaki i te ahua o te pūtau me te antigenicity. Ka mahi ma te hono-whakawhitinga pūmua i roto i nga pūtau, kia mau tonu te hanganga pūtau me nga pūmua mata. Ma tenei ka pai te whiriwhiri a PFA mo te tiaki i nga tohu mata o te mata, ina koa ka wetewete i nga korero pūmua mata i roto i nga whakamatautau immunophenotyping.
Taunakitanga:
● Kukukū: 2-4% PFA Kei te nuinga whakamahia mo te whakatika tino pai.
● Wā Whakatika: Me whakawhao nga pūtau ki te PFA mo te 15-30 meneti i te 2-8°C.
● Rokiroki: I muri i te whakatikatika, me penapena nga pūtau ki te 2-8 ° C mo te rokiroki mo te wa poto. He mea nui kia kaua e penapena nga pūtau kua mau mo te wa roa, na te mea ka ngaro pea te pono o te tohu.
He mea nui ki te karo i te nui o te whakatika, na te mea ka roa te rongo ki te PFA ka arahi ki te autofluorescence pūtau me te whakararu i te whakapouri me te tātaritanga. Whakamahia i nga wa katoa te wa e hiahiatia ana mo te whakatika.
Te Waawha Whakanoho
Ka whakamahia te whakatikatika waihaa ina ko te arotahi o te tātaritanga ki te ihirangi DNA, penei i nga rangahau huringa pūtau. Ko te Ethanol he kaihoko whakamaoritanga e mahi ana ma te kuhu ki roto i te membrane pūtau me te pupuri i te DNA i roto i nga pūtau. Ma tenei ka tino whai hua te whakatika waihanol mo nga whakamatautau i runga i te DNA me nga tātaritanga cytometry rere kei te tirotirohia nga waahanga huringa pūtau, te ihirangi DNA ranei.
Taunakitanga:
● Kukukū: Ko te tikanga, 70-100% te waihā e whakamahia ana.
● Wā Whakatikatika: Ko te tikanga kia 10-15 meneti te roa o te whakatikatika waihano mo nga hua tino pai.
He pai te whakatika o te waihano mo te tiaki i nga wahanga o te huringa pūtau, a ka taea te whakamahi ki te whakakotahi me nga tae here-ANA penei i te propidium iodide (PI) mo te tātari huringa pūtau.
Methanol Fixation
Ko te Methanol tetahi atu taputapu whakatika, ina koa mo nga tātaritanga intracellular. Ka mahi ma te kuhu ki roto i te membrane pūtau me te whakaū i ngā hanganga o roto o te pūtau. Ahakoa e whai hua ana te methanol ki te pupuri i nga pūmua pūtau me nga antigens, ka taea e ia te whakaheke i nga pūtau, ka pa ki te whakamaoritanga o etahi ahuatanga, penei i te rahi o te pūtau me te ahua o te tangata.
Taunakitanga:
● Kukukū: Ko te tikanga, 90-100% te whakamahi methanol.
● Wā Whakatika: 10-15 meneti te nuinga o te wā ka ranea.
He maha nga wa e whakamahia ana te whakatikatika methanol i te wa e ako ana i nga pūmua intracellular, ina koa ka tirotirohia nga tohu i roto i te cytoplasm, i te karihi ranei. Heoi, me whai whakaaro nga kairangahau ki te kaha o te whakahekenga o nga pūtau i te wa e whakamahi ana i te whakatikatika methanol.
Ētahi atu Whakatikatika (hei tauira, Formalin)
Ko te Formalin, he wairewa o te formaldehyde i roto i te wai, tetahi atu whakatikanga e whakamahia ana i roto i te rere cytometry, ahakoa he iti ake i te PFA. Ka whakamahia nuitia te Formalin i roto i te hiona me te immunohistochemistry, i reira ka tiakina pai nga tauira kiko mo te tātari moroiti. Ahakoa ka taea e te formalin te pupuri i nga hanganga pūtau, i te nuinga o te waa kaore i te tūtohutia mo te rere o te cytometry ki te kore e mahi me nga tauira kiko kua mau, na te mea ka raru te tohatoha o nga pūtau me etahi tono rewharewha. He pai ake te whakatikanga o te Formalin mo nga tauira kiko, kaua mo nga pūtau takitahi.
Whakatikatika |
Te aro |
Wā Whakatikatika |
Whakamahinga Manakohia |
Paraformaldehyde (PFA) |
2-4% |
15-30 meneti |
He pai mo te tiaki i nga tohu mata o te pūtau; noa mo te immunophenotyping |
Ewaro |
70-100% |
10-15 meneti |
He pai mo te tātari ihirangi DNA me te rangahau huringa pūtau |
Mewaro |
90-100% |
10-15 meneti |
He pai mo te tātari pūmua intracellular; ka paheke pea nga pūtau |
Formalin |
10% (formaldehyde) |
He rereke (e whakawhirinaki ana ki te kiko) |
I te nuinga o te waa ka whakamahia mo nga tauira kiko, kaua mo nga pūtau takitahi |
Arata'i-a-Taahiraa ki te Whakatikatika i nga Waea mo te Rere Cytometry
Te whakarite i te Tauira Pūtau
I mua i te whakatikatika, he mea nui ki te wehe i nga pūtau mai i te kiko, i te tauira toto ranei. Ko te Centrifugation te tikanga e whakamahia ana mo te whakakorikori i nga pūtau ki roto i te whakatārewatanga. He mea nui ano kia tino horoia nga ruma ki te tango i nga paanui ahurea, i nga toenga parakino ranei, ka raru pea te mahi whakatika.
1. Wehenga Pūtau: Whakamahia nga tikanga wehe paerewa penei i te centrifugation, te tohatoha pūtau ranei hei wehe i nga pūtau o te paanga.
2. Te Horoi: Horoia nga pūtau ki te tote phosphate-buffered saline (PBS) hei tango i te toenga o nga paoho me nga poke ka pa ki te mahi whakatika.
Tikanga Whakatikatika
Kia rite nga pūtau, ko te mahi ka whai ake ko te taapiri i te taapiri ki te whakatārewatanga pūtau. Ko te mea tino whakamahia mo te rerenga cytometry he otinga PFA 2-4%.
1. Taapirihia te taapiri ki te whakatārewatanga pūtau, kia pai te konatunatua.
2. Whakanuia nga ruma ki te whakatika mo te 15-30 meneti i te 2-8°C.
3. I muri i te hekitanga, kia rua nga wa horoi i nga ruma ki te PBS hei tango i te taikaha whakatika.
Nga Waahi Whakatikatika
I muri i te whakatikatika, me ata whakahaere nga ruma. Mena ka hiahiatia he tātaritanga, me whakapouri nga pūtau i mua i te tātari. Mena kei te whakamahere koe ki te penapena i nga pūtau mo te tātaritanga a muri ake nei, whakairihia ano ki roto i te parepare tika ka penapena ki te 2-8°C. A ape i te waiho i nga pūtau i roto i te whakatika mo nga wa roa, na te mea ka nui ake te whakatikatika ka piki ake te autofluorescence me te whakaheke i te kounga tohu.
Nga Tohutohu mo te Whakatikatika Pai i roto i te Rere Cytometry
Te karo i te Whakanoho Rawa
Ka nui ake te whakatikatika i te wa e roa rawa ana nga pūtau ki te whakatika, tera pea ka nui rawa te hono-whakawhitinga o nga pūmua pūtau me te whakararu i te kounga o te raraunga. Ka taea e tenei te arahi ki te autofluorescence, te iti o te here antibody, me te kore tika o nga inenga cytometry rere.Tirohia i nga wa katoa nga wa whakatika mo to momo pūtau motuhake me te whakamatautau kia kore e nui te whakatika.
Wā Whakatika ki te Momo Tauira
Ka rereke pea te wa whakatika pai i runga i te momo pūtau me te ahua o te whakamatautau. Hei tauira, he poto ake pea te wa whakatikanga o nga pūtau aukati i nga tauira kiko. Whakaritea te wa whakatika i runga i nga hiahia motuhake o te momo tauira. Mo te tātari pūmua mata, he poto ake te wa whakatika (10-15 meneti) i te nuinga o te waa. Mo te whakakikorua i roto i te pūtau, te tātari DNA ranei, me roa ake te wa whakatika.
Te Tae I muri i te Whakanoho
Whai muri i te whakatikatika i nga pūtau, ko te whakapouri ki te paturopi, ki te waikano rewharewha ranei he mahi nui ki te tātari cytometry rere. Ko etahi o nga waikano karekoata, ina koa ko nga waikano tandem, ka ngawari ki te whakatika, ka paheke pea mena ka nui te whakatika o nga pūtau. Ka taea e tenei te aukati i te paheketanga o te waikano me te whakarite kia kaha ake nga tohu rewharewha.
Rokiroki Pūtau Pūmau mō te Rere Cytometry
Rokiroki mo te wa poto
Mo te rokiroki mo te wa poto, ka taea te penapena nga pūtau i roto i te pouaka whakamātao i te 2-8°C. He pai tenei ina whakamahere koe ki te tātari i nga pūtau i roto i te ra kotahi, e rua ranei i muri i te whakatikatika. Rokiroki tonu i nga pūtau kua mau ki roto i te pouri kia kore ai te whakamaarama whakaahua, ka pa ki nga tohu korikori.
Rokiroki mo te wa roa
Mo te rokiroki mo te wa roa, ka taea te whakatoo i nga pūtau ki roto i nga purongo whakamaarama. Ko te reo cryopreservation angamaheni ko 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) me te 90% fetal bovine serum (FBS). Heoi, kei te waatea ano nga rongoaa whakamaarama kore-serum penei i te mFreSR™ or CryoStor™ CS10 ka taea te whakamahi ki te karo i nga take e pa ana ki te FBS. Hei aukati i te hanga o te karaihe tio, whakamahia he pouaka tio-tere hei whakatio i nga pūtau. Ka awhina tenei ki te pupuri i te oranga o te pūtau me te whakarite i te rokiroki tika.
Nga Rawe noa hei karo i roto i te Whakatikatika Pūtau mo te Rere Cytometry
Nga Paanga o te Whakatikatika Tika
He maha nga raru ka raru pea te whakatikatika, tae atu ki te autofluorescence, te iti o te here antibody, me te ngoikore o te oranga o te pūtau. Ko enei take ka tino pa ki te tika me te pono o nga hua cytometry rere. Manatokohia i nga wa katoa nga kawa whakatika mo to momo tauira motuhake, me te whakarite kia tika nga tikanga whakatika mo te momo pūtau me nga tohu e tātarihia ana.
Te Whiriwhiri i te Whakatikatika Tika mo to tono
Ko te whiriwhiri i te whakatikanga tika mo to whakamatautau rerenga cytometry he mea nui kia whiwhi hua pono me te tika. He pai ake nga taapiri rereke mo nga tono rereke. Hei tauira, ka whakamahia te PFA mo te tātari pūmua mata, engari he pai te waihano mo nga rangahau-a-DNA.
Wāhanga whakamutunga
He mea nui te whakatikanga o nga pūtau kia angitu ai te tātari cytometry rere. Ka awhina i te pupuri i nga hanganga pūkoro me te whakarite i te pono o nga pūmua me te DNA. Ma te whai i nga kawa whakatika tika me te karo i te whakatikatika nui, ka taea e nga kairangahau te whakarei ake i te tika me te pono. Ma te kowhiri i te taapiri tika mo to whakamatautau ka pai ake te kounga o to hua. Ma te whakatinana i enei mahi tino pai ka taea e to tātaritanga cytometry rerenga he rite tonu, ka taea te whakaputa i nga tirohanga mo nga mahi pūkoro.
Ka whai wāhi nui te whakatika pūtau tika ki te rere cytometry, me nga hua mai i HKeybio tuku rongoā pono. Ko o raatau tukunga e whakarite ana i nga hua o te kounga teitei, a ka whakawhirinakihia e nga kairangahau puta noa i te ao mo te tātari pūtau tika.
FAQ
P: He aha te hiranga o te whakatikanga o te pūtau i roto i te rerenga cytometry?
A: He mea nui te whakatika o nga pūtau i roto i te rerenga cytometry na te mea ka tiakina e ia nga hanganga pūkoro me te whakarite i te tika o nga pūmua me te DNA mo te tātari tika.
P: Kia pehea te roa o nga pūtau me whakatika mo te rere cytometry?
A: Me whakatika nga pūtau mo te 15-30 meneti me te otinga paraformaldehyde (PFA) 2-4% hei pupuri i te pono o te waea.
P: Ka taea e au te whakamahi i te waihano hei whakatika i nga pūtau i roto i te cytometry rere?
A: Ae, ka whakamahia te whakatikatika waihano mo te tātari ihirangi DNA i roto i te rerenga cytometry, ina koa mo nga rangahau huringa pūtau.
P: Ka aha mena ka nui te whakatika o nga pūtau i roto i te rerenga cytometry?
A: Ko te nui o te whakatikatika ka nui rawa te honohono-whakawhitinga, ka puta te autofluorescence me te ngoikore o te here antibody, ka pa ki nga hua cytometry rere.
