Whakatuwheratanga
I tino mohio koe me pehea Ka tutuki te huringa rere i taua mahinga tino pai me te pono? Ko te mea nui ki nga hua tika kei roto i te whakatikatika tika. Ko te taatai rere ka taea e nga kairangahau te ako i nga momo ahuatanga o te aorangi, mai i te rahi o te kaha ki te kaha. Heoi, me te kore whakatikatika tika, kaore pea nga raraunga e whakaatu i nga ahuatanga o te tinana. I roto i tenei tuhinga, ka tirotirohia e matou te hiranga o te whakatika pūtau i roto i te taatai rere, te matapaki i nga tikanga whakatika rereke, me te tiri tohutohu mo nga hua tino pai.
He aha te whakatikatika pūtau i roto i te cytometry rere?
Te whakamāramatanga o te whakatika pūtau
Ko te whakatikatika o te pūtau he mahinga e whakatika ana me te pupuri i nga pūtau ma te aukati i nga huringa o a raatau hanganga, mahi, me te hanga ngota. Ka tutuki tenei mahi ma te pūmua whakawhiti-hono, lipids, me etahi atu waahanga pūtau, whai hua 'nga kohinga ' nga pūtau i roto i o raatau ahuatanga. He mea nui tenei ki te taatai rere i te mea ka aukati te aukati i nga tohu o te pūtau, te whakarereke ranei i nga hanganga pūtau i te wa e tātarihia ana. Ma te whakatika i nga pūtau, ka taea e nga kairangahau te whakarite kia noho rite nga ahuatanga o nga pūtau, ka taea e nga tohu me nga raraunga pono i te wa o te tātaritanga huringa.
He aha te take he mea nui te whakatikatika
He mea nui te whakatikatika tika na te mea e mau tonu ana te pono o nga pūtau pūtau me nga waikawa kūpapa, he mea tino nui mo te tātari i nga huringa huringa tika. Mena kaore i te whakaritea nga pūtau, ka taea e o raatau hanganga me nga tohu miihini, ka huri ranei i te waa, ka arahina ki nga hua kaore e tika ana. Ko te whakatikatika ano he mahi nui ki te whakatuu i nga kohinga maha mo te tātari-maha, ko ia tetahi o nga mea nui o te huringa rere. Ka taea e te hunga kairangahau te aromatawai i nga waahanga pūtau maha, penei i nga tohu mata, i nga pūmua intracellular, me nga ihirangi DNA, i roto i te whakamatautau kotahi. Ki te kore e tika te whakatika, kaore i taea e nga raraunga te kore e rite, kaore i te oti, te arahi ki te pohehe i nga putanga whakamatautau.
Nga momo whakatika whakatika mo te taatai rere
Parafordayhyde (PFA) Whakatikatika
Ko te pararutaldehyde (PFA) tetahi o nga whakatikatika whanui i roto i te huringa rere, i te mea na tona whai hua ki te tiaki i te morphology pūtau me te antigencity. Ka mahi ma te pūmua whakawhiti-hono i roto i nga pūtau, me te whakarite kia noho tonu te hanganga o te pūtau me te rongoa o te mata. Ma tenei ka tino pai te whiriwhiri mo te tiaki i nga tohu papaa, ina koa ka tātarihia te whakaaturanga pūmua i roto i nga whakamatautau immunoesetyop.
Taunakitanga:
● Te kukū: 2-4% PFA e whakamahia ana mo te whakatikatika tino pai.
● Te wa whakatikatika: Me whakauru nga pūtau i PFA mo te 15-30 meneti i te 2-8 ° C.
● Te rokiroki: I muri i te whakatika, me penapena nga pūtau i te 2-8 ° C mo te rokiroki mo te wa poto. He mea nui kia kaua e penapena i nga pūtau kua whakaritea mo nga waa roa, na te mea ka puta tenei ki te ngaro o te pono o te tohu.
He mea nui kia karo i te whakatikatika, kia rite ki te purongo ki te PFA ka arahi ki te autofluorescence me te pokanoa ki te papamuri me te tātari. Whakamahia nga wa katoa e hiahiatia ana mo te wa whakatikatika.
Whakatika whakatika
Whakamahia ai te whakatikatika ethanal i te mea ko te arotahi o te tātaritanga kei runga i nga ihirangi DNA, penei i nga rangahau huringa pūtau. Ko te ethanol he kaihoko dehhadrating e mahi ana ma te uru ki te membrane pūtau me te tiaki i te dna i roto i nga pūtau. Ma tenei ka whai hua te whakatikatika i te Etahal mo te DNA-i runga i te Cytometry e tātari ana kei te tirotirohia nga waahanga huringa CNA, DNA.
Taunakitanga:
● Te kukū: Ko te tikanga, ko te 70-100% e whakamahia ana ethanol.
● Te wa whakatikatika: Ko te whakatikatika ethanol te tikanga ka hiahia 10-15 meneti mo nga hua tino pai.
He pai te whakatika whakatikatika mo te tiaki i nga waahanga huringa pūtau, a ka taea te whakamahi ki nga waikano DNA-herea penei i te proptidium idide (pi) mo te tātaritanga huringa cell.
Whakatikatika Methanol
Ko te Methanol tetahi atu tino whakamahia, ina koa mo nga tātari inscracellular. Ka mahi ma te uru atu ki te membrane pūtau me te whakariterite i nga hanganga o roto o te pūtau. Ahakoa e whai hua ana te Methanol ki te tiaki i nga pūtau Cellular me nga tuawhenua, ka pa ki te whakamaoritanga o etahi ahuatanga, penei i te rahi o te pūtau me te morphology.
Taunakitanga:
● Te kukū: Ko te tikanga, 90-100% ka whakamahia te methanol.
● Te wa whakatikatika: 10-15 meneti te nuinga o te waa.
Ko te whakatikatika methanol e mahi ana i te wa e ako ana i nga rongoa intracelular, ina koa ka tirotirohia nga tohu o roto o te cytoplasm, i te karihi ranei. Heoi, me whai whakaaro nga kairangahau i te paanga mo te whakamahinga pūtau i te wa e whakamahi ana i te whakatikatika Methanol.
Ko etahi atu whakatika (hei tauira, ōkawa)
Ko te Whakaaetanga, he otinga o te momaldehyde i roto i te wai, ko tetahi atu tohu e whakamahia ana i te taatai rere, ahakoa he iti ake te ahua o te PFA. E whakamahia whānuitia ana te reanga i roto i te hitori me te immunohistochemistry, kei te pai te tiaki i nga tauira o te kiko mo te tātaritanga microsomic. Ahakoa ka taea e te Replin te pupuri i nga hanganga pūtau, kaore i te tūtohutia mo te huringa rere me te kore e mahi ki nga tauira kiko. Ko te whakatikatika a te Reipa he pai ake mo nga tauira kiko, kaore mo nga pūtau takitahi.
Whakaū |
Hihiritanga |
Te wa whakatika |
Te whakamahinga e taunakitia ana |
Parafordayhyde (PFA) |
2-4% |
15-30 meneti |
He pai mo te tiaki i nga tohu papaa; noa mo te immunophenotypeping |
Etanal |
70-100% |
10-15 meneti |
Pai mo te tātaritanga tātaritanga DNA me nga rangahau huringa pūtau |
Mernal |
90-100% |
10-15 meneti |
He pai mo te tātari pūmua i waenga; kia raru ai te hapa |
Autina |
10% (furmaldehyde) |
He rereke (ka whakawhirinaki ki te kiko) |
I te nuinga o te wa e whakamahia ana mo nga tauira kiko kiko, kaore mo nga pūtau takitahi |
Taahiraa-i te-taahiraa ki te whakatika i nga pūtau mo te taatai rere
Te whakarite i te tauira pūtau
I mua i te whakatikatika, he mea nui kia wehea nga pūtau mai i te kiko, i te toto toto ranei. Ko te Centrifugation te tikanga tino noa e whakamahia ana mo te aro ki nga pūtau i roto i te whakatārewatanga. He mea nui ano hoki ki te horoi i nga pūtau hei tango i tetahi papaaho ahurea, he mate toenga ranei, ka raru pea te whakaritenga whakatikatika.
1
2.. Horoi: horoia nga pūtau me te hinu phosphate (pbs) ki te tango i nga rongoa toenga me nga whara ka pa ki te whakaritenga whakatika.
Nga tikanga whakatika
Ina rite ana nga pūtau, ko te mahi a muri ake ko te taapiri i te whakatika i te aukati i te pūtau. Ko te whakatika tika mo te taatai rere he 2-4% PFA otinga.
1. Tāpirihia te whakatika ki te aukati i te pūtau, me te whakarite he pai te whakaranu.
2. Whakauruhia nga pūtau me te whakatika mo te 15-30 meneti i te 2-8 ° C.
3. I muri i te whakaurunga, horoia nga pūtau e rua e rua me te pbs hei tango i te taikaha nui.
Nga waahanga whakatikatika-whakatu
I muri i te whakatikatika, me ata whakahaeretia nga pūtau. Mena e hiahiatia ana te tātaritanga, me waiho nga punaha i mua i te tātari. Mena kei te whakamahere koe ki te rokiroki i nga pūtau mo te tātaritanga mo meake nei, ka tuku i a raatau ki te kaiutuutu tika me te rokiroki i a raatau i te 2-8 ° C. A ape i te wehe i nga pūtau i roto i te whakatikatika mo nga waa roa, ka taea e te whakatikatika te arahi ki te piki haere o te autofloorescence me te kounga o te tohu tohu.
He tohutohu mo te whakatikatika tino pai i roto i te huringa rere
Te karo i te whakatikatika
Ko te whakatikatika i te wa e pa ana ki te whakatikatika i te waa roa, ka puta mai i te nui o te hono ki nga pūmua cellular me te whakararu i te kounga o nga raraunga. Ka taea e tenei te arahi ki te autofloorescence, ka whakahekehia te here antibody, me te whakamahi i nga waahanga taapiri rere-a-huarahi e tirotirohia ana e to momo whakatikatika motuhake me te whakamatau.
Te wa whakatika me te momo tauira
Ko te waa whakatikatika tino pai ka rite ki te momo pūtau me te ahua o te whakamatautau. Hei tauira, ka hiahia pea nga pūtau aukati i nga wa whakatikatika poto ake i nga tauira kiko. Whakatikahia te waa whakatikatika i runga i nga hiahia motuhake o te momo tauira. Mo te tātaritanga pūmua mata, he wa whakatikatika poto (10-15 meneti) te nuinga o te waa. Mo te tarai i te tarai, te tātaritanga DNA ranei, ka hiahiatia pea te waa whakatikatika.
Te pupuri i muri i te whakatikatika
I muri i te whakatika i nga pūtau, ko te pupuri me nga antibodies he waikano waikano he taahiraa nui i roto i te tātaritanga rerenga rerenga. Ko etahi o nga waikano e rere ana, ina koa ka taea te aro ki te whakatikatika me te heke iho o nga kohinga. Ka taea e tenei te awhina ki te aukati i te ngoikore o te waimeha me te whakarite kia kaha ake te kaha o nga tohu.
Te penapena i nga pūtau pumau mo te huringa rere
Te rokiroki poto
Mo te rokiroki poto poto, ka taea te penapena i nga pūtau i roto i te pouaka whakamātao i te 2-8 ° C. He pai tenei ki te whakamahere koe ki te tātari i nga pūtau i roto i te ra, e rua ranei i muri i te whakatika. Kei te penapena i nga pūtau pumau i roto i te pouri ki te aukati i te whakaahua whakaahua, ka pa ki nga tohu o te Flurescent.
Te rokiroki wā-roa
Mo te rokiroki mo te wa roa, ka taea te tioata i roto i te maarama cryotresenhanga. Kei roto i te 10% o te sulfoxide (DMSO) me te 90% serum Bovine (Fetal Serum (Fetal Serum (Fetal Serum. Heoi, ko nga rongoā cryostravesty semil rite ki te Mfresr ™, Chostor ™ e waatea ana ka taea te whakamahi ki te aukati i nga take e pa ana ki te FBS.Te hei aukati i nga pūtau. Ka awhina tenei i te pupuri i te whaihua pūtau me te whakarite i te rokiroki tika.
Ko nga Puta noa hei karo i te whakatika pūtau mo te huringa rere
Ngā pānga o te whakatika tika
Ko te whakatikatika tika ka arahi ki te maha o nga raru, tae atu ki te autoflorescence, ka whakahekehia te here antibody, me te koretake o te pūtau ngoikore. Ko enei take ka tino pa ki te tika me te pono o nga hua cytometry rere. Whakamahia nga tikanga whakatika mo to momo tauira motuhake, me te whakarite kia tika nga tikanga whakatikatika mo te momo pūtau me nga tohu e tātarihia ana.
Te kōwhiri i te whakatika tika mo to tono
Ko te whiriwhiri i te whakatika tika mo to whakamatautau huringa rere he mea nui mo te whiwhi hua pono me te tika. He pai ake nga whakatikatika rereke mo nga tono rereke. Hei tauira, ka whakamahia te PFA mo te tātari pūmua mata, i te wa e hangaia ana e te Etanol mo te rangahau DNA.
Wāhanga whakamutunga
He mea nui te whakatikatika i te pūtau ki te whakatutuki i te tātaritanga rerenga rerenga angitu. Ka awhina ia ki te pupuri i nga hanganga pūtau me te whakarite i te pono o te pūmua me te DNA. Na roto i te whai i nga kawa whakatika tika me te karo i te whakatikatika, ka taea e nga kairangahau te whakarei ake i te tika o te raraunga me te pono. Ko te kowhiri i te whakatika tika mo to whakamatautau ka pai ake te kounga o o hua. Ko te whakatinana i enei mahinga pai e whakarite ana ko te tātari i te taatai i to raarangi huringa e whakarato ana i nga mohiotanga rite ki nga mahi pūkoro.
Ko te whakatikatika tika o te pūtau e whai kiko ana i te huringa rere, me nga hua mai i Hycybio tuku whakataunga pono. Ko a ratau tuku ka whakarite i nga hua kounga nui ka whakawhirinaki ki nga kairangahau o te ao mo te tātari pūtau tika.
FQ
Q: He aha te hiranga o te whakatika pūtau i roto i te huringa rere?
A: Ko te whakatikatika pūtau he mea nui i roto i te huringa rere i te wa e penapena ana i nga hanganga pūtau me te whakarite i te pono o te pūmua me te DNA mo te tātaritanga tika.
Q: Kia pehea te roa o nga pūtau kia whakaritea mo te huringa rere?
A: Me whakatika nga pūtau mo te 15-30 meneti me te otinga o te 2-4% pararfordende (PFA) hei pupuri i te pono o te ao.
Q: Ka taea e au te whakamahi i te etanol mo te whakatika pūtau i te huringa rere?
A: Ae, e whakamahia ana te whakatika whakatikatika mo te tātaritanga ihirangi DNA i roto i te huringa rere, ina koa mo nga rangahau huringa pūtau.
Q: Ka ahatia mena ka mutu te whakariterite i nga pūtau i roto i te huringa rere?
A: Ka taea e te whakatikatika te kawe i te rahi o te hono-hono, e arahi ana ki te autofloorescencence me te aukati antibody miiharo, ka pa ki nga hua cytometry rere.
