Kupu Whakataki
Kua whakaaro koe me pehea nga kaiputaiao e tarai ana i nga mano o nga pūtau i roto i nga hēkona ruarua? Ko te Flow cytometry te taputapu kaha e taea ai tenei. Ka taea e nga kairangahau te ako tere me te tika nga ahuatanga o te tinana me te matū o nga pūtau takitahi.
I roto i tenei tuhinga, ka tirotirohia me pehea te panui me te whakamaori i nga hua cytometry rere. Ka ako koe me pehea te tautuhi i nga tohu whakahirahira, te aromatawai i nga ahuatanga o te mate, me te whai matauranga ki nga mahi a te waea. Ko te mohio ki enei hua he mea nui mo te whakatau whakatau i roto i te rangahau pūtaiao me te mahi haumanu.
Te Maramatanga o te Rere Cytometry Hua
Nga Taketake o te Rere Cytometry
Ka mahi te rerenga cytometry ma te whakawhiti i nga pūtau i roto i te kurupae laser i te ine i te rama marara e ia pūtau. Ko te marama marara ka hoatu ki nga kairangahau nga korero nui mo te rahi me te uaua o roto o te pūtau. I tua atu, ka whakamahia nga tohu rewharewha ki te tapanga i nga pūmua motuhake ki roto, ki roto ranei i nga pūtau, e whakaatu ana i nga ahuatanga o te pūkoro.
Ka kohia e nga cytometers rerenga nga raraunga mo te marara marama me nga tawhā fluorescence. Ko nga raraunga marara marama ka hangaia i te wa e taunekeneke ana nga pūtau ki te laser, e whakarato ana i nga korero mo te rahi me te hanganga o roto. Ka awhina enei raraunga ki te whakatau i te kirikiri me te hanga o nga pūtau. Ka kohia nga raraunga rewharewha i te wa e herea ana nga tohu rewharewha motuhake ki nga waahanga pūkoro penei i te pūmua, te DNA ranei, ka tuku marama i runga i te whakaohooho. Ka awhina enei tohu ki te tautuhi i nga tohu o te pūtau, penei i nga pūmua o te mata, i te ihirangi DNA ranei, he mea tino nui kia mohio ki te whanonga pūtau.
Momo Raraunga i roto i te Rere Cytometry
● Marara whakamua (FSC): Ine i te rahi o te pūtau. Ko nga pūtau nui ake ka nui ake te marara whakamua na te mea ka paopao ake te marama.
● Marara taha (SSC): E tohu ana i te uaua o te pūtau, i te hanganga o roto ranei. Ko tenei tawhā e whakaatu ana i te maramatanga me te uaua o te pūtau, ka whai hua ki te wehewehe i nga momo pūtau, ki te kite ranei i nga mea rereke.
● Tawhā Korekorero: E ine ana enei i te kaha o te rewharewha motuhake ka puta mai i te tohu irirangi, waikano, pūmua ranei. Ma te ine i te rewharewha o nga tohu maha, ka taea e te cytometry rere te tautuhi i nga waahanga pūtau motuhake, penei i nga kaiwhakawhiwhi, te DNA, te pūmua ranei, i runga i nga whaainga whakamatautau.
Tawhā |
Whakaahuatanga |
Whakamahinga |
Marara Whakamua (FSC) |
Ka ine i te rahi o te pūtau. Ko nga pūtau nui ake ka marara te marama. |
Ka whakatau i te rahi o nga pūtau. |
Marara Taha (SSC) |
Ka ine i te matatini o roto, i te kirikiri ranei o te pūtau. |
Ka awhina i te aromatawai i te uaua o nga pūtau, i te hanganga ranei. |
Korewharewha |
Ko nga mehua kua tukuna te rama mai i nga tohu tohu. |
Ka tautuhi i nga waahanga pūtau motuhake penei i te pūmua, te DNA ranei. |
Whakaaturanga Whakairoiro Matua i roto i te Rere Cytometry
Ngā Hītorika
He huarahi ngawari nga tohu tohu ki te tiro i nga raraunga tawhā-kotahi i roto i te rerenga cytometry. I te nuinga o te waa ka whakaatu i te kaha o te marara marama, te rewharewha ranei i runga i te tuaka-x, ko te tuaka-y e tohu ana i te maha o nga takahanga (nga pūtau). Ka awhina tenei ahua kauwhata ngawari ki te maarama ki te tohatoha o te tawhā kotahi puta noa i te taupori o nga pūtau.
I roto i nga histograms, ka taea e koe te kite:
● Te neke i nga tihi: Ko te neke ki te taha matau i te kaha o te rewharewha e tohu ana i te pikinga o te whakaaturanga o te tohu tohu. He tohu awhina tenei mo nga huringa o te whakaputanga pūmua, penei i te whakautu ki te maimoatanga.
● Te tohatoha o te tihi: Ko te horahanga o te tihi e whakaatu ana i te maaramatanga ki te rereketanga o te whakaaturanga o te tohu puta noa i te taupori pūtau. Ka tohu pea te tihi whanui he taupori kanorau ake he rereke nga taumata korero, engari ko te tihi whaiti e whakaatu ana i te riterite.
Nga Tohu Ira me nga Marara Marara
Ko nga papa ira, e kiia ana he marara marara, ka whakamahia hei whakaatu i nga raraunga tawhā-rua. Ka taea e enei mahanga te mataki i nga hononga i waenga i nga tawhā motuhake e rua, penei i te marara whakamua (FSC) me te marara taha (SSC), i waenga ranei i nga tohu rewharewha. Ma te whakamahi i nga papa ira, ka taea e koe te tātari i te hononga i waenga i nga tawhā maha i roto i te tirohanga kotahi.
● Te Keeti: I roto i nga papa ira, ka taea e koe te whakauru i nga keeti (nga tapawha, porowhita, polygons ranei) hei wehe i nga waahanga iti o nga pūtau hei tātaritanga ake. Ka taea e Gating te aro ki nga taupori e tutuki ana i etahi paearu, penei i te rahi, te kirikiri, te tohu tohu ranei.
● Te tātari tawhā maha: Ka awhina nga papa ira ki te whakaata i te hononga i waenga i nga taurangi e rua, neke atu ranei, ka taea e koe te wehewehe i waenga i nga taupori pūtau rereke i runga i nga paearu maha, penei i nga tohu tohu, i nga ahuatanga marara ranei. He tino whai hua tenei ina pa ana ki nga taupori pūtau matatini, taupori rereke ranei.
Nga Rautaki Gating hei Tautuhi Taupori Putau
Tikanga Gating |
Whakaahuatanga |
Whakamahi Take |
Quadrant Gating |
Wehea te papa ki nga hauwhā e wha. |
He pai mo te wetewete i nga tawhā e rua (hei tauira, FSC vs SSC). |
Polygon Gating |
Waihanga hanga ritenga hei whakauru i nga tohu raraunga kanorau ake. |
He pai mo nga taupori uaua ake, he rereke te ahua. |
Ellipse Gating |
He rite ki te tapawha engari ka hangaia he rohe porotiti. |
Ka whai hua mo nga taupori kaore i te whakatetahi. |
He kupu whakataki mo te Gating
Ko te Gating he tikanga whakahirahira i roto i te rerenga cytometry e taea ai e koe te tautuhi me te wehe i nga taupori pūtau motuhake mai i te tauira nui ake. Ma te tono kuaha ki o raraunga rerenga cytometry, ka taea e koe te aro ki nga pūtau e whakaatu ana i etahi ahuatanga, penei i te rahi, te uaua, te tohu tohu ranei.
I te nuinga o te waa, ko te tukanga whakangao ko:
● Te kowhiri i te taupori: Ka awhina a Gates ki a koe ki te wehe i tetahi waahanga motuhake o nga pūtau i runga i nga ahuatanga e mohiotia ana. Hei tauira, ka taea e koe te keeti i runga i nga pūtau e pai ana mo tetahi tohu (hei tauira, CD3 mo nga pūtau T), i runga ranei i nga pūtau whai āhuatanga marara motuhake.
● Haunga nga taupori e hiahiatia ana: Ka awhina ano nga keeti ki te whakakore i nga matūriki e kore e hiahiatia, penei i nga pūtau mate, te otaota ranei, ka whakapohehe i to tātaritanga. Ma tenei ka whakarite kia tika nga raraunga ka wetewetehia e koe me te whai kiko ki to rangahau.
Me pehea te whakamahi i te Gating hei tātari i nga taupori
Kia pai ai te whakamaori i nga raraunga rerenga cytometry, he mea nui ki te whakarite i nga keeti tika e aro ana ki te taupori e whai paanga ana. Hei tauira:
● Haunga nga pūtau mate: I te nuinga o nga wa ka whakaatu nga pūtau mate i nga ahuatanga marara motuhake, ka taea te whakamahi ki te wehewehe mai i nga pūtau ora. Ma te kuti i runga i te marara whakamua (FSC) me te marara taha (SSC), ka taea e koe te whakakore i nga pūtau mate, apoptotic ranei ka tihorea o raraunga.
● Te wehewehe i nga taupori motuhake: Ma te Gating ka taea e koe te kowhiri me te tātari i nga waahanga iti o nga pūtau i runga i nga tohu tohu me nga ahuatanga tinana. Hei tauira, ka taea e koe te keeti ki nga pūtau T ma te aro ki tetahi pūmua mata motuhake (hei tauira, CD3) ka tātarihia te whakaaturanga o tetahi atu tohu (hei tauira, nga taumata cytokine).
Ake Ake Rere Cytometry Analysis
Te Rerenga Tae Maha
He tikanga matatau ki te whakamahi i nga tohu rewharewha maha ki te wetewete i nga tohu rereke rereke i te tauira kotahi. Ko tenei tikanga ka tino whakanui ake i te kaha ki te wehewehe i waenga i nga momo pūtau me nga momo iti i roto i te ranunga matatini o nga pūtau.
● He Painga: Ko te painga tuatahi o te cytometry rerenga maha-tae ka taea te tātari i nga tawhā maha i te wa kotahi, kia pai ake ai nga whakamatautau. He tino whaihua tenei ina hiahia koe ki te tirotiro i etahi tohu i runga i te taupori pūtau kotahi.
● Te whakamaori i nga hua maha-tae: Ko ia tohu i roto i nga cytometry rerenga tae maha e hikaka ana e tetahi roangaru o te marama, e taea ai te wehewehenga tika i waenga i nga momo pūtau me nga ahuatanga. He tino awhina tenei i roto i te whakamohiotanga o nga pūtau mate mate, te rangahau mate pukupuku, me etahi atu waahi me tirotirohia nga tohu maha i te wa kotahi.
Momo Tohu |
Ka whakamahia te Fluorochrome |
Taupānga noa |
CD3 (Ngā pūtau T) |
FITC, PE, APC |
Te tautuhi i nga lymphocytes T i roto i te tohu mate. |
CD4 (Ngā pūtau T kaiāwhina) |
PerCP-Cy5.5, APC |
Te tautuhi i nga pūtau T kaiawhina mo te mahi aukati. |
CD8 (Cytotoxic T pūtau) |
PE, APC, BV421 |
Te tautuhi i nga pūtau T cytotoxic i roto i nga urupare aukati. |
CD19 (Ngā pūtau B) |
FITC, PE, PerCP |
Te whakaatu i nga pūtau B i roto i nga rangahau mate pukupuku me te reukemia. |
Ka waiata koe i te PCA, SPADE, me te tSNE mo nga Raraunga Matatini
I te nuinga o te wa ka uru te raraunga cytometry rere ki nga tawhā maha, tera pea ka puta mai nga huingararaunga ahu-nui. Hei tātari i enei huinga raraunga matatini, ka whakamahi nga kairangahau i nga tikanga tātari raraunga matatau:
● Te Tirohanga Wae Matua (PCA): Ko te PCA he tikanga tauanga hei whakaiti i te inenga o nga huingararaunga nui me te pupuri i nga korero maha ka taea. He awhina ki te tautuhi i nga tauira me nga hononga i waenga i nga taurangi maha, kia maamaa ake te tiro i nga raraunga uaua.
● SPADE (Spanning-tree Progression Analysis of Density-normalized Events): Ko te SPADE he tikanga e whakamahia ana hei tātari i nga huingararaunga nui ma te aro ki nga taupori iti o nga pūtau kei roto i te taupori rereke. Ko tenei tikanga ka taea e nga kairangahau te ako i te hihiri o nga taupori pūtau i roto i te waa, i te whakautu ranei ki te maimoatanga.
● tSNE (t-Distributed Stochastic Neighbor Embedding): Ko te tSNE he algorithm e whakamahia ana hei whakaiti i te rahinga o nga raraunga, he maamaa ake te tiro i nga hononga i waenga i nga pūtau i te mokowā ahu-nui. He tino pai tenei mo te whakarōpū i nga pūtau he rite nga ahuatanga.
Ko enei tikanga matatau ka taea e nga kairangahau te tango i nga tirohanga whai kiko mai i nga raraunga rerenga cytometry matatini me te whakamaarama i te whakamaoritanga o nga huingararaunga nui.
Te Whakamaori i nga Hua
Te Tautuhinga Hauora vs
Ka whakamahia nuitia te rerenga cytometry i roto i nga waahi haumanu ki te kite i nga mea rereke i roto i nga pūtau, penei i te mate pukupuku. Ma te whakatairite i nga tauira korikori me te marara, ka taea e koe te wehewehe i waenga i nga pūtau hauora me era e whakaatu ana i nga ahuatanga rereke.
Hei tauira:
● Te kimi mate pukupuku: I roto i te oncology, ka whakamahia te rere cytometry ki te tautuhi i nga pūtau mate pukupuku ma te rapu i nga tohu mata motuhake, i nga huringa ranei i roto i nga ihirangi DNA e rite ana ki nga pūtau mate pukupuku.
● Te whakaahuatanga pūtau ārai mate: Ka taea hoki te whakamahi i te Flow cytometry ki te tātari i ngā pūtau ārai mate, te tautuhi i ngā pūtau whakahohe, mahara, me ngā pūtau T ture i roto i ngā urupare ārai mate, e āwhina ana ki te aro turuki i te mahi ārai mate, te ahunga whakamua o te mate.
Te Maramatanga ki nga Mana Pai me te Kino
Hei whakapumau i te mana o o hua, he mea nui ki te whakauru i nga mana pai me te kino ki roto i o whakamatautau:
● Mana pai: He tauira e whakaatu ana i tetahi tohu tohu motuhake, me te whakarite kia pai te mahi o te whakamatautau.
● Mana kino: He tauira e kore e whakaatu i te tohu tohu, e awhina ana ki te kite i te rere o te papamuri, te here kore motuhake ranei.
He mea nui nga mana whakahaere mo te manatoko i te tika o o raraunga me te whakarite kia tino whakaata nga hua kua kitea ki nga ahuatanga koiora e ako ana koe.
Tohutohu Mahi mo te Whakamaori Raraunga Rere Cytometry
Whakaurua nga Mana Tika
Ko te whakauru i nga mana whakahaere i roto i o whakamatautau rerenga cytometry he mea nui kia whiwhi raraunga tika. Ka awhina nga mana whakahaere ki:
● Whakamanahia te whaihuatanga o nga tohu kareoro i whakamahia.
● Me whakarite ko te rewharewha kua kitea he mea motuhake ki nga pūtau i whäia, ehara i te mea na nga mahi toi whakamätautau, i te here kore motuhake.
Kia mohio ki te Hoahoa Whakamatau
He mea nui nga whakamatautau i hangaia pai hei whakarite kia whai kiko nga raraunga ka kohia e koe, ka taea te whakaputa. Whakaarohia nga mea e whai ake nei i te wa e hoahoa ana i to whakamatautau:
● Whakaritenga tauira: He mea nui te whakahaere tauira tika hei whakaiti i te rereketanga. Hei tauira, he mea tino nui te whakarite kei roto i te whakatārewatanga pūtau-kotahi mo te tātari tika.
● Hoahoa Paewhiri: Ko te kowhiringa o nga tohu me nga fluorochromes me noho ki runga i nga whainga o te whakamatautau. Hei tauira, mena kei te pirangi koe ki te tātari i nga taupori pūtau ārai mate, tīpakohia nga tohu tohu e tautuhi ana i nga huinga iti o te pūtau T rereke.
Whakamutunga
Ko te panui me te whakamaori i nga hua cytometry rere me tino mohio ki te hangarau, tikanga, me te horopaki koiora. Ma te mohio ki nga kaupapa o te cytometry rere, te tātari raraunga matatau, me te hoahoa whakamatautau tika, ka taea e koe te whai matauranga nui e akiaki ana i te kitenga putaiao me te whakatau i nga whakatau haumanu. Ahakoa e mahi ana i roto i te rangahau mate pukupuku, i te mate mate, i te tātaritanga ranei, he mea nui te whakamaori i nga raraunga rerenga cytometry mo te whakatau whakatau e pai ake ai nga maimoatanga me te pai ake o nga hua o te manawanui. Mo te hunga e whai ana ki te whakarei ake i a raatau rangahau, tātaritanga haumanu ranei, nga hua mai i Ka tukuna e HKeybio nga otinga ahurei hei whakatairanga i nga tono cytometry rere, e whakarato ana i nga taputapu utu nui mo te whakamaoritanga raraunga tika me te tātari pūtau.
FAQ
Q: He aha te Flow Cytometry?
A: Ko te Flow cytometry he tikanga e whakamahia ana ki te wetewete i nga ahuatanga o te tinana me te matū o nga pūtau, matūriki ranei ma te whakawhiti i roto i te kurupae laser. Ka ine i te titaritari marama me te korikori hei kohikohi raraunga mo te rahi, te uaua, me nga tohu.
P: Me pehea taku whakamaori i nga hua o te rerenga cytometry?
A: Hei whakamaori i nga hua o te rerenga cytometry, arotahi ki nga raraunga marara marama (marara whakamua me te taha taha) me te kaha o te rewharewha hei tautuhi i nga taupori pūtau i runga i te rahi, te uaua, me te tohu tohu.
P: He aha nga rautaki keeti i roto i te Flow Cytometry?
A: Ko te kuti i roto i te rerenga cytometry te tikanga mo te wehe i nga taupori pūtau motuhake ma te whakatau i nga rohe i runga i nga ahuatanga marara, marara ranei, e taea ai te tātaritanga taipitopito ake.
P: He aha te take e whai hua ai te rerenga rerenga rerenga maha?
A: Ka taea e te cytometry rere te tae maha ki te tātari i te wa kotahi o nga tohu maha i roto i te tauira kotahi, kia maarama ake ai nga taupori pūtau me o raatau ahuatanga.
P: Me pehea te awhina a Flow Cytometry ki te rangahau mate pukupuku?
A: Ka awhina te rere o te cytometry ki te tautuhi i nga tohu motuhake o nga pūtau mate pukupuku me te tātari i nga ahuatanga o te puku, e whakarato ana i nga tino mohiotanga mo te tātaritanga, te matapaetanga, me te tirotiro maimoatanga.
