Kupu Whakataki
Kua whakaaro koe me pehea nga kaiputaiao e tarai ana i nga mano o nga pūtau i roto i nga hēkona ruarua? Ko te Flow cytometry te taputapu kaha e taea ai tenei. Ka taea e nga kairangahau te ako tere me te tika nga ahuatanga o te tinana me te matū o nga pūtau takitahi.
I roto i tenei tuhinga, ka tirotirohia me pehea te panui me te whakamaori i nga hua cytometry rere. Ka ako koe me pehea te tautuhi i nga tohu whakahirahira, te aromatawai i nga ahuatanga o te mate, me te whai matauranga ki nga mahi a te waea. Ko te mohio ki enei hua he mea nui mo te whakatau whakatau i roto i te rangahau pūtaiao me te mahi haumanu.
Te Maramatanga o te Rere Cytometry Hua
Nga Taketake o te Rere Cytometry
Ka mahi te rerenga cytometry ma te whakawhiti i nga pūtau i roto i te kurupae laser i te ine i te rama marara e ia pūtau. Ko te marama marara ka hoatu ki nga kairangahau nga korero nui mo te rahi me te uaua o roto o te pūtau. I tua atu, ka whakamahia nga tohu rewharewha ki te tapanga i nga pūmua motuhake ki roto, ki roto ranei i nga pūtau, e whakaatu ana i nga ahuatanga o te pūkoro.
Ka kohia e nga cytometers rerenga nga raraunga mo te marara marama me nga tawhā fluorescence. Ko nga raraunga marara marama ka hangaia i te wa e taunekeneke ana nga pūtau ki te laser, e whakarato ana i nga korero mo te rahi me te hanganga o roto. Ka awhina enei raraunga ki te whakatau i te kirikiri me te hanga o nga pūtau. Ka kohia nga raraunga rewharewha i te wa e herea ana nga tohu rewharewha motuhake ki nga waahanga pūkoro penei i te pūmua, te DNA ranei, ka tuku marama i runga i te whakaohooho. Ka awhina enei tohu ki te tautuhi i nga tohu o te pūtau, penei i nga pūmua o te mata, i te ihirangi DNA ranei, he mea tino nui kia mohio ki te whanonga pūtau.
Momo Raraunga i roto i te Rere Cytometry
● Marara whakamua (FSC): Ine i te rahi o te pūtau. Ko nga pūtau nui ake ka nui ake te marara whakamua na te mea ka paopao ake te marama.
● Marara taha (SSC): E tohu ana i te uaua o te pūtau, i te hanganga o roto ranei. Ko tenei tawhā e whakaatu ana i te maramatanga me te uaua o te pūtau, ka whai hua ki te wehewehe i nga momo pūtau, ki te kite ranei i nga mea rereke.
● Tawhā Korekorero: E ine ana enei i te kaha o te rewharewha motuhake ka puta mai i te tohu irirangi, waikano, pūmua ranei. Ma te ine i te rewharewha o nga tohu maha, ka taea e te cytometry rere te tautuhi i nga waahanga pūtau motuhake, penei i nga kaiwhakawhiwhi, te DNA, te pūmua ranei, i runga i nga whaainga whakamatautau.
Tawhā |
Whakaahuatanga |
Whakamahinga |
Marara Whakamua (FSC) |
Ka ine i te rahi o te pūtau. Ko nga pūtau nui ake ka marara te marama. |
Ka whakatau i te rahi o nga pūtau. |
Marara Taha (SSC) |
Ka ine i te matatini o roto, i te kirikiri ranei o te pūtau. |
Ka awhina i te aromatawai i te uaua o nga pūtau, i te hanganga ranei. |
Korewharewha |
Ko nga mehua kua tukuna te rama mai i nga tohu tohu. |
Ka tautuhi i nga waahanga pūtau motuhake penei i te pūmua, te DNA ranei. |
Whakaaturanga Whakairoiro Matua i roto i te Rere Cytometry
Ngā Hītorika
He huarahi ngawari nga tohu tohu ki te tiro i nga raraunga tawhā-kotahi i roto i te rerenga cytometry. I te nuinga o te waa ka whakaatu i te kaha o te marara marama, te rewharewha ranei i runga i te tuaka-x, ko te tuaka-y e tohu ana i te maha o nga takahanga (nga pūtau). Ka awhina tenei ahua kauwhata ngawari ki te maarama ki te tohatoha o te tawhā kotahi puta noa i te taupori o nga pūtau.
I roto i nga histograms, ka taea e koe te kite:
● Te neke i nga tihi: Ko te neke ki te taha matau i te kaha o te rewharewha e tohu ana i te pikinga o te whakaaturanga o te tohu tohu. He tohu awhina tenei mo nga huringa o te whakaputanga pūmua, penei i te whakautu ki te maimoatanga.
● Te tohatoha o te tihi: Ko te horahanga o te tihi e whakaatu ana i te maaramatanga ki te rereketanga o te whakaaturanga o te tohu puta noa i te taupori pūtau. Ka tohu pea te tihi whanui he taupori kanorau ake he rereke nga taumata korero, engari ko te tihi whaiti e whakaatu ana i te riterite.
Nga Tohu Ira me nga Marara Marara
Ko nga papa ira, e kiia ana he marara marara, ka whakamahia hei whakaatu i nga raraunga tawhā-rua. Ka taea e enei mahanga te mataki i nga hononga i waenga i nga tawhā motuhake e rua, penei i te marara whakamua (FSC) me te marara taha (SSC), i waenga ranei i nga tohu rewharewha. Ma te whakamahi i nga papa ira, ka taea e koe te tātari i te hononga i waenga i nga tawhā maha i roto i te tirohanga kotahi.
● Te Keeti: I roto i nga papa ira, ka taea e koe te whakauru i nga keeti (nga tapawha, porowhita, polygons ranei) hei wehe i nga waahanga iti o nga pūtau hei tātaritanga ake. Ka taea e Gating te aro ki nga taupori e tutuki ana i etahi paearu, penei i te rahi, te kirikiri, te tohu tohu ranei.
● Te tātari tawhā maha: Ka awhina nga papa ira ki te whakaata i te hononga i waenga i nga taurangi e rua, neke atu ranei, ka taea e koe te wehewehe i waenga i nga taupori pūtau rereke i runga i nga paearu maha, penei i nga tohu tohu, i nga ahuatanga marara ranei. He tino whai hua tenei ina pa ana ki nga taupori pūtau matatini, taupori rereke ranei.
Nga Rautaki Gating hei Tautuhi Taupori Putau
Tikanga Gating |
Whakaahuatanga |
Whakamahi Take |
Quadrant Gating |
Wehea te papa ki nga hauwhā e wha. |
He pai mo te wetewete i nga tawhā e rua (hei tauira, FSC vs SSC). |
Polygon Gating |
Waihanga hanga ritenga hei whakauru i nga tohu raraunga kanorau ake. |
He pai mo nga taupori uaua ake, he rereke te ahua. |
Ellipse Gating |
He rite ki te tapawha engari ka hangaia he rohe porotiti. |
Ka whai hua mo nga taupori kaore i te whakatetahi. |
He kupu whakataki mo te Gating
Ko te Gating he tikanga whakahirahira i roto i te rerenga cytometry e taea ai e koe te tautuhi me te wehe i nga taupori pūtau motuhake mai i te tauira nui ake. Ma te tono kuaha ki o raraunga rerenga cytometry, ka taea e koe te aro ki nga pūtau e whakaatu ana i etahi ahuatanga, penei i te rahi, te uaua, te tohu tohu ranei.
I te nuinga o te waa, ko te tukanga whakangao ko:
● Te kowhiri i te taupori: Ka awhina a Gates ki a koe ki te wehe i tetahi waahanga motuhake o nga pūtau i runga i nga ahuatanga e mohiotia ana. Hei tauira, ka taea e koe te keeti i runga i nga pūtau e pai ana mo tetahi tohu (hei tauira, CD3 mo nga pūtau T), i runga ranei i nga pūtau whai āhuatanga marara motuhake.
● Haunga nga taupori e hiahiatia ana: Ka awhina ano nga keeti ki te whakakore i nga matūriki e kore e hiahiatia, penei i nga pūtau mate, te otaota ranei, ka whakapohehe i to tātaritanga. Ma tenei ka whakarite kia tika nga raraunga ka wetewetehia e koe me te whai kiko ki to rangahau.
Me pehea te Whakamahi i te Gating ki te Tātari Taupori
Kia pai ai te whakamaori i nga raraunga rerenga cytometry, he mea nui ki te whakarite i nga keeti tika e aro ana ki te taupori e whai paanga ana. Hei tauira:
● Haunga nga pūtau mate: I te nuinga o nga wa ka whakaatu nga pūtau mate i nga ahuatanga marara motuhake, ka taea te whakamahi ki te wehewehe mai i nga pūtau ora. Ma te kuti i runga i te marara whakamua (FSC) me te marara taha (SSC), ka taea e koe te whakakore i nga pūtau mate, apoptotic ranei ka tihorea o raraunga.
● Te wehewehe i nga taupori motuhake: Ma te Gating ka taea e koe te kowhiri me te tātari i nga waahanga iti o nga pūtau i runga i nga tohu tohu me nga ahuatanga tinana. Hei tauira, ka taea e koe te keeti ki nga pūtau T ma te aro ki tetahi pūmua mata motuhake (hei tauira, CD3) ka tātarihia te whakaaturanga o tetahi atu tohu (hei tauira, nga taumata cytokine).
Ake Ake Rere Cytometry Analysis
Te Rerenga Tae Maha
He tikanga matatau ki te whakamahi i nga tohu rewharewha maha ki te wetewete i nga tohu rereke rereke i te tauira kotahi. Ko tenei tikanga ka tino whakanui ake i te kaha ki te wehewehe i waenga i nga momo pūtau me nga momo iti i roto i te ranunga matatini o nga pūtau.
● He Painga: Ko te painga tuatahi o te cytometry rerenga maha-tae ka taea te tātari i nga tawhā maha i te wa kotahi, kia pai ake ai nga whakamatautau. He tino whaihua tenei ina hiahia koe ki te tirotiro i etahi tohu i runga i te taupori pūtau kotahi.
● Te whakamaori i nga hua maha-tae: Ko ia tohu i roto i nga cytometry rerenga tae maha e hikaka ana e tetahi roangaru o te marama, e taea ai te wehewehenga tika i waenga i nga momo pūtau me nga ahuatanga. He tino awhina tenei i roto i te whakamohiotanga o nga pūtau mate mate, te rangahau mate pukupuku, me etahi atu waahi me tirotirohia nga tohu maha i te wa kotahi.
Momo Tohu |
Ka whakamahia te Fluorochrome |
Taupānga noa |
CD3 (Ngā pūtau T) |
FITC, PE, APC |
Te tautuhi i nga lymphocytes T i roto i te tohu mate. |
CD4 (Ngā pūtau T kaiāwhina) |
PerCP-Cy5.5, APC |
Te tautuhi i nga pūtau T kaiawhina mo te mahi aukati. |
CD8 (Cytotoxic T pūtau) |
PE, APC, BV421 |
Te tautuhi i nga pūtau T cytotoxic i roto i nga urupare aukati. |
CD19 (Ngā pūtau B) |
FITC, PE, PerCP |
Te whakaatu i nga pūtau B i roto i nga rangahau mate pukupuku me te reukemia. |
Ka waiata koe i te PCA, SPADE, me te tSNE mo nga Raraunga Matatini
I te nuinga o te wa ka uru te raraunga cytometry rere ki nga tawhā maha, tera pea ka puta mai nga huingararaunga ahu-nui. Hei tātari i enei huinga raraunga matatini, ka whakamahi nga kairangahau i nga tikanga tātari raraunga matatau:
● Te Tirohanga Wae Matua (PCA): Ko te PCA he tikanga tauanga hei whakaiti i te inenga o nga huingararaunga nui me te pupuri i nga korero maha ka taea. He awhina ki te tautuhi i nga tauira me nga hononga i waenga i nga taurangi maha, kia maamaa ake te tiro i nga raraunga uaua.
● SPADE (Spanning-tree Progression Analysis of Density-normalized Events): Ko te SPADE he tikanga e whakamahia ana hei tātari i nga huingararaunga nui ma te aro ki nga taupori iti o nga pūtau kei roto i te taupori rereke. Ko tenei tikanga ka taea e nga kairangahau te ako i te hihiri o nga taupori pūtau i roto i te waa, i te whakautu ranei ki te maimoatanga.
● tSNE (t-Distributed Stochastic Neighbor Embedding): Ko te tSNE he algorithm e whakamahia ana hei whakaiti i te rahinga o nga raraunga, he maamaa ake te tiro i nga hononga i waenga i nga pūtau i te mokowā ahu-nui. He tino pai tenei mo te whakarōpū i nga pūtau he rite nga ahuatanga.
Ko enei tikanga matatau ka taea e nga kairangahau te tango i nga tirohanga whai kiko mai i nga raraunga rerenga cytometry matatini me te whakamaarama i te whakamaoritanga o nga huingararaunga nui.
Te Whakamaori i nga Hua
Te Tautuhinga Hauora vs
Ka whakamahia nuitia te rerenga cytometry i roto i nga waahi haumanu ki te kite i nga mea rereke i roto i nga pūtau, penei i te mate pukupuku. Ma te whakatairite i nga tauira korikori me te marara, ka taea e koe te wehewehe i waenga i nga pūtau hauora me era e whakaatu ana i nga ahuatanga rereke.
Hei tauira:
● Te kimi mate pukupuku: I roto i te oncology, ka whakamahia te rere cytometry ki te tautuhi i nga pūtau mate pukupuku ma te rapu i nga tohu mata motuhake, i nga huringa ranei i roto i nga ihirangi DNA e rite ana ki nga pūtau mate pukupuku.
● Te whakaahuatanga pūtau ārai mate: Ka taea hoki te whakamahi i te Flow cytometry ki te tātari i ngā pūtau ārai mate, te tautuhi i ngā pūtau whakahohe, mahara, me ngā pūtau T ture i roto i ngā urupare ārai mate, e āwhina ana ki te aro turuki i te mahi ārai mate, te ahunga whakamua o te mate.
Te Maramatanga ki nga Mana Pai me te Kino
Hei whakapumau i te mana o o hua, he mea nui ki te whakauru i nga mana pai me te kino ki roto i o whakamatautau:
● Mana pai: He tauira e whakaatu ana i tetahi tohu tohu motuhake, me te whakarite kia pai te mahi o te whakamatautau.
● Mana kino: He tauira e kore e whakaatu i te tohu tohu, e awhina ana ki te kite i te rere o te papamuri, te here kore motuhake ranei.
He mea nui nga mana whakahaere mo te manatoko i te tika o o raraunga me te whakarite kia tino whakaata nga hua kua kitea ki nga ahuatanga koiora e ako ana koe.
Tohutohu Mahi mo te Whakamaori Raraunga Rere Cytometry
Whakaurua nga Mana Tika
Ko te whakauru i nga mana whakahaere i roto i o whakamatautau rerenga cytometry he mea nui kia whiwhi raraunga tika. Ka awhina nga mana whakahaere ki:
● Whakamanahia te whaihuatanga o nga tohu kareoro i whakamahia.
● Me whakarite ko te rewharewha kua kitea he mea motuhake ki nga pūtau i whäia, ehara i te mea na nga mahi toi whakamätautau, i te here kore motuhake.
Kia mohio ki te Hoahoa Whakamatau
He mea nui nga whakamatautau i hangaia pai hei whakarite kia whai kiko nga raraunga ka kohia e koe, ka taea te whakaputa. Whakaarohia nga mea e whai ake nei i te wa e hoahoa ana i to whakamatautau:
● Whakaritenga tauira: He mea nui te whakahaere tauira tika hei whakaiti i te rereketanga. Hei tauira, he mea tino nui te whakarite kei roto i te whakatārewatanga pūtau-kotahi mo te tātari tika.
● Hoahoa Paewhiri: Ko te kowhiringa o nga tohu me nga fluorochromes me whai i runga i nga whaainga o te whakamatautau. Hei tauira, mena kei te pirangi koe ki te tātari i nga taupori pūtau ārai mate, tīpakohia nga tohu tohu e tautuhi ana i nga huinga iti o te pūtau T rereke.
Wāhanga whakamutunga
Ko te panui me te whakamaori i nga hua cytometry rere me tino mohio ki te hangarau, tikanga, me te horopaki koiora. Ma te mohio ki nga kaupapa cytometry rere, tātaritanga raraunga matatau, me te hoahoa whakamatautau tika, ka taea e koe te whai matauranga nui e akiaki ana i te kitenga pūtaiao me te whakatau i nga whakatau haumanu. Ahakoa e mahi ana i roto i te rangahau mate pukupuku, immunology, tātaritanga ranei, he mea nui te whakamaori i nga raraunga rerenga cytometry mo te whakatau i nga whakatau e pai ake ai nga maimoatanga me te pai ake o nga hua o te manawanui. Mo te hunga e whai ana ki te whakarei ake i a raatau rangahau, tātaritanga haumanu ranei, nga hua mai i Ka tukuna e HKeybio nga otinga ahurei hei whakatairanga i nga tono cytometry rere, e whakarato ana i nga taputapu utu nui mo te whakamaoritanga raraunga tika me te tātari pūtau.
FAQ
Q: He aha te Flow Cytometry?
A: Ko te Flow cytometry he tikanga e whakamahia ana ki te wetewete i nga ahuatanga o te tinana me te matū o nga pūtau, matūriki ranei ma te whakawhiti i roto i te kurupae laser. Ka ine i te titaritari marama me te korikori hei kohikohi raraunga mo te rahi, te uaua, me nga tohu.
P: Me pehea taku whakamaori i nga hua cytometry rere?
A: Hei whakamaori i nga hua o te rerenga cytometry, arotahi ki nga raraunga marara marama (marara whakamua me te taha taha) me te kaha o te rewharewha hei tautuhi i nga taupori pūtau i runga i te rahi, te uaua, me te tohu tohu.
P: He aha nga rautaki keeti i roto i te Flow Cytometry?
A: Ko te kuti i roto i te rerenga cytometry te tikanga mo te wehe i nga taupori pūtau motuhake ma te whakatau i nga rohe i runga i nga ahuatanga marara, marara ranei, e taea ai te tātaritanga taipitopito ake.
P: He aha te take e whai hua ai te rerenga rerenga rerenga maha?
A: Ka taea e te cytometry rere te tae maha ki te tātari i te wa kotahi o nga tohu maha i roto i te tauira kotahi, kia maarama ake ai nga taupori pūtau me o raatau ahuatanga.
P: Me pehea te awhina a Flow Cytometry ki te rangahau mate pukupuku?
A: Ka awhina te rere o te cytometry ki te tautuhi i nga tohu motuhake o nga pūtau mate pukupuku me te tātari i nga ahuatanga o te puku, e whakarato ana i nga tino mohiotanga mo te tātaritanga, te matapaetanga, me te aroturuki maimoatanga.
