Kupu Whakataki
Kua whakaaro koe me pehea nga kairangahau e tarai ana i nga mano o nga pūtau i roto i nga meneti noa? Ko te Flow Cytometry ka taea tenei. Ka tukuna e tenei tikanga he tātaritanga tere, ahu maha o nga pūtau takitahi, e whakaatu ana i nga tirohanga tino nui ki o raatau ahuatanga tinana me te matū.
I roto i tenei tuhinga, ka tirotirohia e matou nga mahi o roto o te rerenga cytometry, mai i te whakarite tauira ki te tātaritanga raraunga whakamutunga. Ka hohonu ake to maarama ki te whakarereketanga o tenei taputapu kaha ki te rangahau putaiao me nga tono haumanu puta noa i nga mara penei i te immunology, rangahau mate pukupuku, me era atu.
Ko nga Maapono Taketake o te Rere Cytometry
Pūnaha Fluidics
Ka timata te rere o te cytometry ki te punaha wīwī, kei reira te tauira kei roto ngā pūtau, matūriki rānei ka whakatārewahia ki roto i te wairewa wai, ka kuhu atu ki roto i te rerenga rerenga. Ka whakamahia e te punaha he wai putunga e karapoti ana i te tauira me te whakarite kia hono nga pūtau ki te konae kotahi. Ka whakarite tenei ka tātarihia nga pūtau takitahi i a raatau e haere ana i roto i te kurupae laser. Ko te punaha fluidics te kawenga mo te nekehanga tika me te whakaritenga o nga pūtau i roto i te taputapu, he mea tino nui mo te whakarite i nga inenga tika i te wa o te mahi tātari. Ki te kore he punaha fluidics e mahi pai ana, karekau e taea te pupuri i te tino tika me te tere e mohiotia ana te cytometry rere. Ko te kaha o te punaha ki te whakangao i nga pūtau ki roto i te awa konae-kotahi e taea ai te whakamaarama taipitopito, te tātari pūtau-kotahi, he mea nui kia mohio ki te whanonga me nga ahuatanga o nga pūtau takitahi.
Te Marara Marama me te Korewharewha
Ko te maapono matua e whai ake nei i roto i te rerenga cytometry he pehea te taunekeneke o nga pūtau ki te marama. Ko te Marara Whakamua (FSC) ka ine i te rahi o te pūtau, ko te Marara taha (SSC) ka ine i te matatini o roto, penei i te kirikiri, te hanganga pūtau ranei. Ko enei tawhā marara e rua e whakarato ana i nga korero taketake mo te hanganga tinana o te pūtau.
I tua atu, he mahi nui te fluorescence ki te tautuhi i nga tohu motuhake me nga ngota ngota kei roto i nga ruma. I te wa e tapaina ana nga pūtau ki nga tohu rewharewha, ka tuku marama ki nga roangaru rereke ka kitea ki nga laser. Ko tenei tukunga orooro e whakarato ana i nga korero taipitopito mo te noho o nga pūmua motuhake, te waikawa karihi, etahi atu ngota ngota kei roto i te pūtau. Ko te whakakotahitanga o te marara marama me te rewharewha ka taea te tātari i nga waahanga-maha o nga pūtau, kia mohio ai nga kairangahau ki o raatau taonga.
Nga Kaipupuri me te Tukatuka Tohu
I te wa e haere ana nga pūtau i roto i te laser, ka kitea nga tohu marara marama me nga tohu fluorescent e nga kaitirotiro maamaa, penei i nga photodiodes me nga ngongo photomultiplier. Ka hopuhia e enei kaitirotiro nga tohu kua puta ka huri hei raraunga mamati. Ka tukatukahia enei raraunga e te rorohiko, ka taea e nga kairangahau te tarai me te whakamaori i nga ahuatanga o nga ruma. Ko nga raraunga ka puta ka kitea i roto i nga momo whakatakotoranga, penei i te histograms, ira tohu, i nga tikanga matatau ake ranei, i runga i te uaua o te whakamatautau.
Ko te tika me te tairongo o nga kaitirotiro he mea nui hei whakarite kia whakaatahia e nga raraunga ka hopukina nga ahuatanga pono o nga pūtau e tātarihia ana. Na te ahunga whakamua i roto i te hangarau puhoi, kua kaha ake te rere o te cytometry, e taea ai te kite i nga tawhā maha i te wa kotahi, me te whakarei ake i te kaha o te tikanga.
Tawhā |
Inenga |
Te kaupapa |
Marara Whakamua (FSC) |
Marara te marama ki te ahunga whakamua |
Ka ine i te rahi o te pūtau |
Marara Taha (SSC) |
Marara te marama i te 90° |
Ka ine i te matatini o roto, te kirikiri ranei |
Korewharewha |
Marama mai i nga fluorophores |
Ka kitea nga tohu motuhake, nga pūmua ranei o roto/waho nga pūtau |
Te Mahi a Lasers i roto i te Flow Cytometry
Momo Taiaho me te Mahi
I roto i te cytometry rere, he mea nui nga lasers mo te whakahihiri i nga tohu rewharewha e piri ana ki nga ruma. Ko nga cytometers rere o naianei ka whakamahi i nga laser maha ki te whakaohooho i nga fluorophores rereke. Ko ia taiaho ka anga ki tetahi roangaru motuhake e whakahohe ana i nga waikano karewharewha, i nga pūmua ranei e piri ana ki nga ruma. Ko tenei kaha ki te whakamahi i nga laser maha ka taea te tātari matawhānui o te maha o nga tawhā i runga i te pūtau kotahi, ka hanga i te cytometry rere he taputapu tino nui mo nga whakamatautau uaua. Ko nga taiaho ehara i te mea whakahihiri noa i nga tohu rewharewha engari ka whakarato hoki i te rama e hiahiatia ana mo te ine i te rahi o te pūtau me te uaua o roto ma te marara marama. Na tenei ka waiho nga laser hei kohatu kokonga o te hangarau.
Momo Taiaho |
Te roangaru |
Mahi |
Fluorophores Hihiko |
Taiaho puru |
488 nm |
Ka whakahihiri i nga fluorophores matomato |
FITC, GFP |
Taiaho Whero |
633 nm |
Ka whakahihiri i nga fluorophores whero-whero |
APC, Alexa Fluor 647 |
Taiaho puru |
405 nm |
Ka whakahihiri i te puru me te UV fluorophores |
DAPI, Pacific Blue |
Whakawhitiwhiti Taiaho me nga Waea
I te wa e haere ana nga ruma i roto i te kurupae laser, ka puta te marara marama ki nga huarahi rereke. Ko te marara whakamua ka ine i te nui o te marama e marara ana ki te ahunga o te kurupae laser, e whakarato ana i nga korero mo te rahi o te pūtau. Ko te marara taha, ka inehia ki te koki 90-tohu ki te taiaho, ka ine i te nui o te marama e marara ana i nga hanganga o roto o te pūtau, e whakaatu ana i nga mohiotanga ki tona uaua o roto.I tua atu i te marara, ko nga tohu rewharewha e piri ana ki nga ruma ka whakaputa marama i nga roangaru motuhake i te wa e hikaka ana e te laser. Ka mauhia tenei rama e nga kaitirotiro, ka whakamahia hei ine i te noho o nga tohu motuhake, nga pūmua ranei i runga i te mata o te pūtau, i roto ranei i te pūtau. Ko te whakakotahitanga o te marara marama me te rewharewha te mea e taea ai te tātari taipitopito o nga pūtau i roto i te cytometry rere.
Tauira Whakaritenga mo te Rere Cytometry
Tapanga Pūtau me te Waikano Korekore
Mo te tātaritanga cytometry rere, me tapanga tuatahi nga pūtau ki te waikano karewharewha, parepare paturopi ranei. Ka herea enei tapanga ki nga pūmua, tohu tohu ranei i te mata o te pūtau, i roto ranei i te pūtau, ka taea te kitea me te ine i te wa o te mahi tātari. Ko nga tohu noa e whakamahia ana i roto i te cytometry rere ko nga tae-a-DNA, ka taea te aromatawai i te oranga me te hauora o nga pūtau, me nga paturopi conjugated fluorescently, e aro ana ki nga pūmua motuhake i runga i te mata o te pūtau. Ko te tukanga o te tapanga pūtau ka whakarite ka taea e te cytometer rere te tautuhi i nga tohu o te hiahia, me te whakarato i nga korero whakahirahira mo nga ahuatanga o te pūtau. Hei tauira, ka tapaina pea e nga kairangahau nga pūtau parepare me nga paturopi ki nga tohu mata motuhake hei tātari i nga urupare aukati, te haere whakamua ranei o te mate.
Te Arotahi Hydrodynamic
Ko tetahi mahi nui i roto i te rerenga cytometry ko te arotahi hydrodynamic, kei reira te punaha fluidics e akiaki ana i te whakatārewatanga o te pūtau ki roto i te awa whaiti, me te whakarite kia haere nga pūtau i te taiaho takitahi. Ko tenei tikanga ka whakarite kia tātari takitahi ia pūtau, he mea nui kia whiwhi raraunga tika. Ko te arotahi hydrodynamic ka taea te wehewehe o nga pūtau i roto i te tauira, kia taea ai te wetewete me te kore e pokanoa mai i nga ruma tata.Ko te arotahi hydrodynamic tetahi o nga mea matua e rerekee ai te cytometry rere mai i etahi atu tikanga, penei i te microscopy, kaore pea e taea te tātari i nga taupori nui o nga pūtau i te tere, i te pai ranei.
Kohikohi Raraunga me te Tatari
Te Gating me te Whakaaturanga Raraunga
Ina kohia nga raraunga mai i te rerenga cytometer, ka whakamahia nga tikanga keeti hei tātari me te whakaata i nga taupori pūtau motuhake. Ko nga tikanga tuku iho penei i te histograms me nga tohu ira ka whakamahia hei whakaatu i nga raraunga. Ko enei tirohanga ka taea e nga kairangahau te whakarōpū i nga pūtau i runga i nga ahuatanga penei i te rahi, te kirikiri, me te rewharewha.Ko nga tikanga hou, penei i te PCA (Principal Component Analysis), SPADE (Spanning-tree Progression Analysis of Density-normalized Events), me te tSNE (t-Distributed Stochastic Neighbor Mambedding), ka whakamahia ki te tātari i nga huinga raraunga matatini. Ka taea e enei algorithms matatau nga kairangahau ki te tautuhi i nga tauira maamaa i roto i nga huinga raraunga nui me te tango i nga tirohanga koiora whai kiko.
Tātari Tawhā-maha
Ko tetahi o nga kaha nui o te rere cytometry ko tona kaha ki te ine i nga tawhā maha i te wa kotahi. Ma tenei kaha ka taea te tātari taipitopito o nga pūtau, penei i te ine i te rahi, te whakaputanga pūmua, me te oranga i roto i te whakamatautau kotahi. Ka taea e te cytometry rere te ine ki runga ki te 30 tawhā mo ia pūtau, he pai mo te ako i nga taupori pūtau uaua, penei i te hunga e kitea ana i roto i te mate pukupuku, i nga urupare aukati ranei.He mea tino nui te tātari tawhā-maha mo te ako i nga taupori rerekee, he rereke pea nga pūtau i roto i nga ahuatanga maha. Ko tenei kaha ki te ine i nga ahuatanga maha i te wa kotahi ka whakawhiwhia ki nga kairangahau he pikitia tino katoa o te taupori pūtau e rangahaua ana.
Nga Whakamahinga Rere Cytometry
Immunophenotyping
Ko tetahi o nga tono tino noa o te rerenga cytometry ko te immunophenotyping, e uru ana ki te tātari i nga pūtau aukati i runga i o raatau tohu mata. Ka taea e te rere cytometry te ine i te wa kotahi te maha o nga tohu rereke i runga i nga pūtau aukati, ka taea e nga kairangahau te whakarōpū i nga momo pūtau, te tautuhi i nga urupare aukati, me te aro turuki i te ahunga whakamua o te mate. Kei te whakamahia nuitia i roto i te tātaritanga o te ngoikoretanga o te mate, te reukemia, te lymphoma, me etahi atu tikanga e pa ana ki te aukati. Kua noho te Immunophenotyping hei taputapu nui i roto i te rangahau me te mahi haumanu mo te mohio ki te mahi a te punaha mate me te tautuhi i nga mate o te pūkoro.
Te rangahau mate pukupuku
He mahi nui te rerenga cytometry ki te rangahau mate pukupuku, ina koa ki te mohio ki te koiora o te mate pukupuku. Ka taea e nga kairangahau te ako i nga ihirangi DNA o nga pūtau, te kimi tohu pukupuku, me te ine i nga reiti whakahiatotanga o nga pūtau. Ma te whakamahi i te cytometry rere, ka taea e nga kaiputaiao te aro turuki me pehea te urupare o nga pūtau mate pukupuku ki te maimoatanga, te aromatawai i te kaha o nga pukupuku, me te tautuhi i nga whaainga rongoa hou.He mea nui tenei tikanga ki te ako mo nga mate pukupuku hematologic penei i te reukemia me te lymphoma, me te rangahau puku totoka, e whakarato ana i nga whakaaro hei arahi i nga whakatau maimoatanga.
Matauranga moroiti me te Hematology
I tua atu i te ako i nga pūtau tangata, ka whakamahia whanuitia te rerenga cytometry i roto i te rangahau moroiti ki te ako i nga huakita, nga huaketo, me etahi atu tukumate. Ka taea e ia te tautuhi i nga moroiti i runga i o raatau ahuatanga motuhake, penei i te rahi, te ahua, me te whakaaturanga pūmua. I roto i te hematology, ka whakamahia te cytometry rere ki te ako i nga pūtau toto, ki te kite i nga rerekee o nga tatauranga toto, me te tirotiro i nga mate penei i te anemia me te reukemia.
Taupānga |
Mara |
Te kaupapa |
Immunophenotyping |
Immunology |
Whakar |
Te rangahau mate pukupuku |
Te mate pukupuku |
Te ako i te koiora pūtau mate pukupuku, te kimi tohu pukupuku, te aro turuki i nga urupare maimoatanga |
Te tātari moroiti |
Microbiology |
Te tautuhi me te tātari i nga tukumate i runga i nga ahuatanga o te tinana |
Hematology |
Hematology |
Te rangahau i nga taupori toto, te tirotiro i nga mate e pa ana ki te toto |
T te Future of Rere Cytometry
Te Ahutanga o te Hangarau
Kei te tere haere te mara o te rerenga cytometry, me nga hangarau hou e whakarei ake ana i ona kaha. Ka taea e nga punaha teitei te tirotiro i nga mano tini o nga pūtau i roto i te hēkona, i te mea ko nga whirihoranga maha-taiaho te whakanui ake i te maha o nga tawhā kitea, te whakapai ake i te whānuitanga me nga taipitopito o nga whakamatautau. Ko te whakakotahitanga o te rerenga rerenga whakaahua, e hono ana i te cytometry rere tuku iho me te miihini, ka taea e nga kairangahau te tiki whakaahua taipitopito o nga pūtau me nga raraunga tawhā-maha. Ko enei ahunga whakamua hangarau kei te kaha ake te rere o te cytometry, e taea ai e nga kairangahau te mahi tātaritanga uaua ake, me te whai matauranga hohonu ki te koiora pūtau.
Te Whakawhanui Tono
I te mea kei te tipu haere tonu te rere o te cytometry, kei te toro haere ana tono ki nga waahi hou penei i te rongoa whaiaro, immunotherapy, me te kitenga o nga pūtau onge. Ko te kaha ki te tātari i te maha o nga momo tohu tohu pūkoro me nga taonga ka waiho te cytometry rere he taputapu nui mo nga kairangahau i nga waahi maha, mai i te maimoatanga mate pukupuku ki te tirotiro mate hopuhopu.
Wāhanga whakamutunga
Ko te Flow cytometry he taputapu tino nui i roto i te rangahau koiora hou, e whakaatu ana i nga tirohanga ki nga ahuatanga me nga whanonga o nga pūtau takitahi i te tere kaore i rite. Mai i te rangahau mate pukupuku ki te mate mate, he nui, he rereke hoki ana tono. I te mea kei te ahu whakamua tonu te hangarau, kei te tipu haere tonu te tika me nga whakamahinga o tenei tikanga, ka noho hei taonga nui mo te rangahauiao me te rangahau rongoa. Na tona whanaketanga tere, kare e kore ka noho tonu te rerenga cytometry ki mua o te kitenga koiora me te tātaritanga haumanu.
Mo nga kamupene penei HKeybio , e tuku ana i nga otinga cytometry rerenga whakamua, ka taea e tenei hangarau te whakarato i nga whakaaro nui ki te whanonga pūtau me te whakakaha i nga mahi rangahau. Ko o raatau hua he painga ahurei, he mea nui ki te ahu whakamua o te rangahau koiora me te rangahau haumanu.
FAQ
Q: He aha te Flow Cytometry?
A: Ko te Flow cytometry he tikanga e whakamahia ana ki te tātari me te ine i nga ahuatanga o te tinana me te matū o nga pūtau. Ka mahi ma te whakatārewa i nga pūtau i roto i te awa wai, ka tukuna ma roto i nga lasers, me te ine i te marara marama me te marara.
Q: He pehea te mahi a Flow Cytometry?
A: Ka whakamahia e te Flow cytometry nga taiaho ki te tātari i nga pūtau takitahi i runga i te rahi, te uaua o roto, me nga tohu rewharewha. Ko nga tohu kua kitea ka huri hei raraunga hei tātari.
Q: He aha nga tono matua o Flow Cytometry?
A: Ka whakamahia te rerenga cytometry i roto i te mate mate, te rangahau mate pukupuku, te microbiology, me te hematology hei tātari me te whakariterite i nga pūtau i runga i nga ahuatanga rereke.
P: He aha te mea nui te Flow Cytometry ki te rangahau?
A: Ko te rere o te cytometry e whakarato ana i te tere tere, te raraunga tawhā-maha, e taea ai te tātari tere o nga taupori pūtau nui, he mea tino nui mo te rangahauiao me te rangahau rongoa.
Q: He pehea te tika o te Flow Cytometry?
A: He tino tika te rere o te cytometry, na te mea ka taea e ia te ine i nga tawhā maha o nga pūtau kotahi i te tere me te tika, e whakarato ana i nga raraunga pono mo te rangahau me te taatai.
