Introductio
Have vos umquam miratus sum quomodo fluunt cytometria tam accurata et certa analysi cellularum attingit? Clavis ad accuratos proventus in propria cellula fixificatione iacet. Fluor cytometria permittit investigatoribus varias notas cellularum, a magnitudine ad intensionem fluorescentiae, studere. Nihilominus, sine certa fixione, notitia veras proprietates cellulares non considerare potest. In hoc articulo explorabimus momentum fixationis cellae in cytometria defluentia, diuersas fixationum rationes discutere, ac apices optimorum eventuum communicare.
What is Cell Fixation in Flu Cytometry?
Definition of Cellae Fixation
Cellula fixatio est processus qui stabilit et conservat cellulas impediendo mutationes in structura, functione et compositione hypothetica. Processus hic fit per chemicum cross-connexionem servo, lipidorum et aliis componentibus cellulis, efficaciter cellulas 'congelantes' in statu praesenti. Hoc magni ponderis est in cytometria fluxum, quod impedit degradationem venalium cellularum vel structurarum cellularum in analysi alteratione. Investigatores figentes cellulas efficere possunt ut cellularum notae constantes maneant, quae certas mensuras et certas notitias in analysi cytometriae fluentis permittit.
Quid solidamentum est Important
Propria fixatio essentialis est quia conservat integritatem servo cellulosi et acida nucleica, quae certae analyseos cytometriae fluxus cruciales sunt. Si cellulae non sunt fixae, earum structura et figendi hypotheticas tempus degradare vel mutare possunt, inducentes ad leves et inaccuratas exitus. Fixatio etiam munus criticum exercet in cellulis stabiliendis pro analysi multi- parametri, quae una est e praecipuis viribus cytometriae fluentis. Inquisitores permittit ut simul plures cellulas notas aestimare, ut figmenta superficiei, servo intracellulare et DNA contentum, in uno experimento. Sine certa fixatione, notitia obtenta inconstans vel imperfecta esse potuit, ducens ad interpretationem eventuum experimentalium.
Genera Fixation Methodi pro O Cytometria
Paraformaldehyde (PFA) Fixation
Paraformaldehyde (PFA) est una e latissime fixativo in cytometria fluxu adhibito, praesertim ob eius efficaciam in morphologiam et antigenicitatem cellam conservandam. Operatur cum servo transversos inter cellulas, ut tam structurae cellulosae quam dapibus superficies integrae maneant. Hoc efficit PFA electionem optimam ad conservandas notas superficiei cellulas, praesertim cum analysing expressionem superficiei interdum in experimentis immunophenotypis.
Commendatio:
● Concentratio: 2-4% PFA communiter pro bene solidamentum.
● Tempus Fixationis: Cellae in PFA incubare debent pro 15-30 momentis ad 2-8°C.
Repono: Post fixationem, cellulae 2-8°C recondantur ad breve tempus. Interest non cellas fixas ad tempus protractum condere, quod ad integritatem notae detrimentum ducere potest.
Magni interest vitare nimiam fixationem, sicut diuturna expositio ad PFA potest ducere ad autofluorentiam cellularum et impedire subsequentem maculam et analysim. Semper uti minimam quantitatem temporis solidi requisitam.
Ethanol Fixation
Fixatio Ethanol communiter adhibetur cum umbilicus analysi in DNA contenta est, sicut in studiis cycli cellularum. Ethanol est agens dehydrans, quod operatur membranam cellulam penetrando et DNA intra cellulas conservans. Hoc facit solidamentum ethanolum apprime utile ad pertentationes DNA fundatae et cytometriae analyses fluentes ubi cycli scenici cellulae vel DNA contenti examinantur.
Commendatio:
● Concentratio: Typice, 70-100% ethanolum adhibetur.
● Fixation Time: Ethanol fixationem typice requirit 10-15 minuta pro melioribus eventibus.
Est specimen fixationis Ethanol cycli celi conservandi, et adhiberi potest in compositione cum tincturis DNA ligandis sicut propidium iodidi (PI) pro analysi cycli cellularum.
Methanolum Fixation
Methanol alia vulgariter usus est fixativa, praesertim analysibus intracellulares. Operatur membranam cellam penetrando et structuras internas cellae stabiliendo. Dum methanolum valet ad conservationem cellularum et antigenorum, potest facere DECREMENTUM cellae, quae interpretationem notarum quarundam notarum incursum potest, sicut magnitudo cellae et morphologia.
Commendatio:
● Concentratio: Typice, 90-100% methanolum adhibetur.
● Fixation Time: 10-15 minuta plerumque sufficiunt.
Methanolum fixatio saepe adhibetur cum servo intracellulares, praesertim cum figmenta intra cytoplasmum vel nucleum examinant. Investigatores autem considerare debent potentialem DECREMENTUM cellae cum methanolo fixatione utentes.
Aliae fixativae (exempli gratia Formalin)
Formalina, solutio formaldehydi in aqua, alia cytometria fixativa usus est in fluxu, quamquam minus communis est quam PFA. Formalina late adhibetur in histologia et immunohistochemistica, ubi efficaciter conservat textus exempla pro analysi microscopica. Etsi formalin structuras cellulas conservare potest, plerumque non commendatur pro cytometria fluxu, nisi cum fixa exemplaria textus operatur, sicut potest impedire genus cellae et aliquas applicationes fluorescentiae. Fiscatio formalin aptissima est ad exemplaria textus, non ad singulas cellulas.
Fixative |
Concentratio |
Fixation Time |
Commendatur Usu |
Paraformaldehyde (PFA) |
2-4% |
15-30 minuta |
Specimen ad conservandam cellulam superficiei indicum; commune pro immunophenotyping |
Ethanol |
70-100% |
10-15 minuta |
Optima pro DNA content analysin et studia cycli cellularum |
Methanol |
90-100% |
10-15 minuta |
Apta analysi intracellularia; ut faciam cellulam DECREMENTUM |
Formalin |
10% (formaldehyde) |
Variatur (dependet a TEXTUS) |
Generaliter adhibentur ad exempla certa textus, non ad singulas cellulas |
GRADATUS Rector ad Fixing Cellulae fluunt Cytometriae
Praeparans Cellam Sample
Ante fixificationem, necesse est cellulas e textu vel sanguine sample segregare. Centrifugatio communissima est methodus applicandi cellulas in suspensione adhibitas. Etiam criticum est cellulas lavare penitus removere quaelibet instrumenta culturae vel contaminantium residua, quae cum processus fixationi se impedire possunt.
1. Cellae Isolatio: Modi solitarii vexillum utere, ut centrifugatio vel cellularum genus ad cellulas usurarum separandas.
2. Lavatio: Cellulas lava cum SAL (PBS) phosphate (PBS) ad removendum residua media et contaminantium quae processus fixationis afficere potuerunt.
Fixation De modo procedendi
Postquam cellulae parantur, proximus gradus est ut ligamentum cellae fixativae addat. Plerumque usus cytometriae fixativae pro fluxu solutionis 2-4% PFA est.
1. Adde fixativam ad cellam suspensionis, procurans bene permixtam.
2. Cellulas fixativas per 15-30 minuta ad 2-8°C incubant.
3. Post incubationem, lava cellulas bis cum PBS ad detrahendum excessum fixativae.
Gradus Post-Fixation
Post fixationem, cellulae diligenter tractandae sunt. Si ulterius analysis necessaria est, cellulae ante analysim maculatae sunt. Si cellulas in futura analysi condere cogitas, eas resuspende in congruo quiddam et eas in 2-8°C. Cellulas in fixativo per longas periodos vitare, sicut super- fixatio ad autofluorescentiam auctam ducere potest et signum qualitatis imminuere.
Tips for Optimal Fixation in flow Cytometry
Vitare Plus-Fixation
Plus-fixatio fit cum cellae fixativae nimium diu apertae sunt, quae in nimia transmissione servo cellularum et qualitatem notitiarum componunt. Hoc perducere potest ad autofluorescentiam, ligamen anticorpus reductum, et mensurarum cytometriae inaccurate fluxum. Semper fixationi suadeo tempora reprehendo pro speciei cellae specificae et experimentum ad vitandam super- fixationem.
Fixation Time vs. Sample Type
Tempus bene fixationis variari potest secundum genus cellae et experimenti natura. Exempli gratia, immunes cellae brevioribus fixificationis temporibus quam exemplaria textus requirere possunt. Aptare solidamentum temporis secundum specificas necessitates exempli generis. Pro analysi superficiei interdum, tempore fixationi breviori (10-15 minuta) sufficere solet. Ad analysin intracellularem maculationem vel DNA, requiri potest tempus fixationis longioris.
Post tinguere Fixation
Post cellulas fixas, inficiens cum elementorum vel fluorescentium fucis, est gradus criticus in analysi cytometriae fluxus. Tincturae aliquot fluorescentes, praesertim tandem tingui, sensitivas esse possunt ad fixationem et si cellae plus fixae sunt degradare. Ad optimos eventus maculas, commendatur cellas ante fixationem maculare, quoties fieri potest. Hoc adiuvare potest ne degradationem tingunt et signa fluorescentiae fortius in tuto collocentur.
Repono Fixarum Cellulae pro O Cytometry
Tempus PRAECLUSIO
Ad breve tempus repositionis, cellulae fixae in armario frigidario condiri possunt 2-8°C. Hoc specimen est cum cellulas intra diem vel duos post fixationem resolvere cogitas. Cellas fixas semper in tenebris reponunt ne photobleaching, quae signa fluorescentium afficere possunt.
Long-Term PRAECLUSIO
Ad diuturnum tempus, cellulae in instrumentis cryopraeservationis concrescere possunt. Medium cryopreservationis typicum constat ex 10% sulfoxide dimethyl (DMSO) et 90% foetus bovinum serum (FBS). Nihilominus, serum solutiones cryopreservationis liberae sicut mFreSR™ vel CryoStor™ CS10 praesto sunt et adhiberi possunt ad vitandas quaestiones cum FBS adiunctis. Ut ne crystalli crystalli formationem adhibeant, moderato freezer ut cellulas congelatur. Hoc adiuvat cellam viability conservandam et in tuto collocando.
Cautiones communes ad fuge in Cell fixation pro Flu Cytometria
Effectus Improprie Fixation
Impropria fixatio ad plures difficultates ducere potest, inter autofluorescentiam, ligationem anticorporis reductam, cellam viability pauperem. Hae quaestiones signanter afficere possunt accurationem et fidem proventus cytometriae proventuum. Semper cognoscere protocolla fixationi pro speciei speciei specifici, et curare ut conditiones fixationes aptae sint pro cella speciei et figendi enucleandae.
Eligens ius Fixative ad Application tuum
Apta fixativa eligendo experimentum cytometriae fluxum tuum pendet ad certos et accuratos eventus obtinendos. Diversae fixativae diversis applicationibus aptiores sunt. Exempli gratia, PFA communiter pro analysi superficiei adhibetur, dum ethanol est specimen studiis DNA fundatum. Priusquam experimentum, investigare optimam fixativam pro specifica applicatione et protocollo fixationi accommodare.
conclusio
Proprie cellula fixatio necessaria est ad effectum deducendi analysin cytometriam consequendam. structuras cellulares conservare iuvat et integritatem servo et DNA praestat. Secundum propriam fixationem protocolla et plus-fixationum vitationem, investigatores notitias accurationis et constantiae augere possunt. Apta fixativum deligendo pro experimento tuo meliorem altiorem eventorum tuorum qualitatem. Has optimas praxis exsequens efficit ut analysis cytometriae fluxus tuus in functiones cellularum pervestigationes constantes et reproducibiles praebeat.
Firmamentum cellae propriae munus clavis agit cytometriae influentiae, et res e HKeybio certas solutiones praebeo. Eorum oblationes summus qualitas eventus procurant et ab inquisitoribus terrarum orbis ad accuratam analysin cellulam confidunt.
FAQ
Q: Quid est momentum fixationis cellae in cytometria fluxum?
A: Cellula fixatio in cytometria fluxu pendet, ut structuras cellulosas conservat et integritatem servo et DNA ad accurate analysim praestat.
Q: Quousque figi debent cellulae cytometriae fluxus?
A: Cellulae typice figendae sunt pro 15-30 momentis cum 2-4% paraformaldehyde (PFA) solutione ad integritatem cellulosam conservandam.
Q: Possumne ethanolum uti ad cellulam solidamentum in cytometria fluxum?
A: Ita, ethanol fixatio communiter pro DNA analysi contentorum in cytometria fluxu, praesertim pro cyclo cellularum studiorum.
Q: Quid accidit si cellulae cytometriae influunt nimis fixae?
A: Plus-fixatio nimiam ligationem facere potest, ducens ad autofluorescentiam et ligationem anticorporis pauperis, quae eventum cytometriae fluxum afficere potest.
