Flow Cytometry အတွက် ဆဲလ်များကို ပြုပြင်နည်း

နိဒါန်း

သိချင်ဖူးလား။ flow cytometry သည် တိကျပြီး ယုံကြည်စိတ်ချရသော ဆဲလ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို ရရှိပါသလား။ တိကျသောရလဒ်များအတွက် သော့ချက်မှာ မှန်ကန်သောဆဲလ်များကို ပြုပြင်ခြင်းတွင် တည်ရှိသည်။ Flow cytometry သည် သုတေသီများအား အရွယ်အစားမှ fluorescence ပြင်းထန်မှုအထိ ဆဲလ်သွင်ပြင်လက္ခဏာအမျိုးမျိုးကို လေ့လာနိုင်စေပါသည်။ သို့သော်လည်း မှန်ကန်သော ပြုပြင်မွမ်းမံမှုမရှိဘဲ၊ ဒေတာသည် စစ်မှန်သော ဆယ်လူလာဂုဏ်သတ္တိများကို ထင်ဟပ်နိုင်မည်မဟုတ်ပေ။ ဤဆောင်းပါးတွင်၊ flow cytometry တွင် cell fixation ၏အရေးပါပုံကို လေ့လာပြီး၊ မတူညီသော fixation နည်းလမ်းများကို ဆွေးနွေးပြီး အကောင်းဆုံးရလဒ်များအတွက် အကြံပြုချက်များကို မျှဝေပါမည်။

 

Flow Cytometry တွင် Cell Fixation ဆိုသည်မှာ အဘယ်နည်း။

Cell Fixation ၏အဓိပ္ပါယ်

Cell fixation သည် ဆဲလ်များ၏ဖွဲ့စည်းပုံ၊ လုပ်ငန်းဆောင်တာနှင့် မော်လီကျူးဖွဲ့စည်းပုံပြောင်းလဲမှုများကို တားဆီးခြင်းဖြင့် တည်ငြိမ်စေပြီး ထိန်းသိမ်းပေးသည့် လုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤလုပ်ငန်းစဉ်ကို ဓာတုဗေဒနည်းအရ ချိတ်ဆက်ထားသော ပရိုတိန်းများ၊ lipid နှင့် အခြားသော ဆဲလ်လူလာ အစိတ်အပိုင်းများ အနေဖြင့် ၎င်းတို့၏ လက်ရှိအခြေအနေရှိ ဆဲလ်များကို ထိရောက်စွာ 'အေးခဲခြင်း' ဖြင့် ရရှိသည်။ ၎င်းသည် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွင်း ဆယ်လူလာအမှတ်အသားများ ယိုယွင်းပျက်စီးခြင်း သို့မဟုတ် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွင်း ဆဲလ်လူလာတည်ဆောက်ပုံများ ပြောင်းလဲခြင်းကို တားဆီးပေးသောကြောင့် ၎င်းသည် flow cytometry တွင် အထူးအရေးကြီးပါသည်။ ဆဲလ်များကို ပြုပြင်ခြင်းဖြင့်၊ သုတေသီများသည် flow cytometry ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွင်း တိကျသောတိုင်းတာမှုများနှင့် ယုံကြည်စိတ်ချရသော အချက်အလက်များကို ခွင့်ပြုပေးသည့် ဆဲလ်များ၏ ဝိသေသလက္ခဏာများ တသမတ်တည်း ရှိနေကြောင်း သုတေသီများက အာမခံနိုင်ပါသည်။

ဘာကြောင့် Fixation က အရေးကြီးတာလဲ။

တိကျသောစီးဆင်းမှု cytometry ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် အရေးကြီးသော ဆဲလ်လူလာပရိုတိန်းများနှင့် နူကလိစ်အက်ဆစ်များ၏ ခိုင်မာမှုကို ထိန်းသိမ်းထားသောကြောင့် မှန်ကန်သောပြင်ဆင်ခြင်းသည် မရှိမဖြစ်လိုအပ်ပါသည်။ ဆဲလ်များကို မပြုပြင်ပါက၊ ၎င်းတို့၏ဖွဲ့စည်းပုံနှင့် မော်လီကျူးအမှတ်အသားများသည် အချိန်နှင့်အမျှ ပြောင်းလဲသွားကာ ယုံကြည်စိတ်ချရသော ရလဒ်များဆီသို့ ဦးတည်သွားနိုင်သည်။ Fixation သည် flow cytometry ၏ အဓိက အားသာချက်များထဲမှ တစ်ခုဖြစ်သည့် multi-parameter ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် ဆဲလ်များကို တည်ငြိမ်စေရာတွင်လည်း အရေးပါသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ပါသည်။ ၎င်းသည် သုတေသီများအား စမ်းသပ်မှုတစ်ခုတွင် မျက်နှာပြင်အမှတ်အသားများ၊ အတွင်းဆဲလ်ပရိုတင်းများနှင့် DNA ပါဝင်မှုများကဲ့သို့သော ဆဲလ်အင်္ဂါရပ်များစွာကို တစ်ပြိုင်နက် အကဲဖြတ်နိုင်စေပါသည်။ မှန်ကန်သော ပြုပြင်မွမ်းမံမှုမရှိဘဲ၊ ရရှိသောဒေတာသည် ကွဲလွဲနေနိုင်သည် သို့မဟုတ် မပြည့်စုံနိုင်သောကြောင့် စမ်းသပ်မှုရလဒ်များကို လွဲမှားစွာအဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုနိုင်စေသည်။

 

Flow Cytometry အတွက် Fixation Methods အမျိုးအစားများ

Paraformaldehyde (PFA) ပြုပြင်ခြင်း။

Paraformaldehyde (PFA) သည် flow cytometry တွင် အသုံးများဆုံး fixatives များထဲမှ တစ်ခုဖြစ်ပြီး၊ အဓိကအားဖြင့် ဆဲလ်ပုံသဏ္ဍာန်နှင့် antigenicity ကို ထိန်းသိမ်းရာတွင် ၎င်း၏ထိရောက်မှု ကြောင့်ဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် ဆဲလ်များအတွင်းရှိ ပရိုတိန်းများကို ချိတ်ဆက်ကာ ဆဲလ်ဖွဲ့စည်းပုံနှင့် မျက်နှာပြင်ပရိုတိန်းနှစ်ခုလုံး မပျက်မစီး ရှိနေကြောင်း သေချာစေခြင်းဖြင့် အလုပ်လုပ်သည်။ ၎င်းသည် PFA သည် ဆဲလ်မျက်နှာပြင်အမှတ်အသားများကို ထိန်းသိမ်းရန်အတွက် အထူးကောင်းမွန်သော ရွေးချယ်မှုတစ်ခုဖြစ်ပြီး အထူးသဖြင့် immunophenotyping စမ်းသပ်မှုများတွင် မျက်နှာပြင်ပရိုတင်းဖော်ပြမှုကို ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာသည့်အခါတွင်ဖြစ်သည်။

အကြံပြုချက်-

● အာရုံစူးစိုက်မှု- 2-4% PFA ကို အကောင်းဆုံးပြင်ဆင်မှုအတွက် အသုံးများသည်။

● ပြုပြင်ချိန်- ဆဲလ်များကို 2-8°C တွင် 15-30 မိနစ်ကြာ PFA တွင် ပေါက်သင့်သည်။

● သိုလှောင်မှု- ပြုပြင်ပြီးနောက်၊ ရေတိုသိုလှောင်မှုအတွက် ဆဲလ်များကို 2-8°C တွင် သိမ်းဆည်းသင့်သည်။ ပုံသေဆဲလ်များကို အချိန်ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းခြင်းမပြုရန် အရေးကြီးသောကြောင့်၊ ၎င်းသည် အမှတ်အသား ခိုင်မာမှုကို ဆုံးရှုံးသွားစေနိုင်သည်။

PFA ကို ကြာရှည်စွာ ထိတွေ့ခြင်းက ဆဲလ်များ အလိုအလျောက် တောက်တောက်ဖြစ်စေနိုင်ကာ နောက်ဆက်တွဲ စွန်းထင်းမှုနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတို့ကို အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေနိုင်သောကြောင့် အလွန်အကျွံပြုပြင်ခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ရန် အရေးကြီးပါသည်။ ပြုပြင်ရန်အတွက် လိုအပ်သော အနည်းဆုံးအချိန်ပမာဏကို အမြဲသုံးပါ။

Ethanol Fixation

ဆဲလ်လည်ပတ်လေ့လာမှုများကဲ့သို့ DNA ပါဝင်မှုအပေါ် အာရုံစိုက်သည့်အခါ အီသနော fixation ကို အများအားဖြင့် အသုံးပြုသည်။ Ethanol သည် ဆဲလ်အမြှေးပါးကို ထိုးဖောက်ဝင်ရောက်ပြီး ဆဲလ်အတွင်းရှိ DNA ကို ထိန်းသိမ်းပေးခြင်းဖြင့် လုပ်ဆောင်သော ရေဓာတ်ခန်းခြောက်စေသော အေးဂျင့်ဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် ဆဲလ်လည်ပတ်မှုအဆင့်များ သို့မဟုတ် DNA ပါဝင်မှုကို စစ်ဆေးသည့်နေရာတွင် DNA အခြေပြု စစ်ဆေးမှုများနှင့် flow cytometry ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက် အီသနော fixation သည် အထူးအသုံးဝင်စေသည်။

အကြံပြုချက်-

● အာရုံစူးစိုက်မှု- ပုံမှန်အားဖြင့် 70-100% အီသနောကို အသုံးပြုသည်။

● Fixation Time- Ethanol ပြုပြင်ခြင်းသည် ပုံမှန်အားဖြင့် အကောင်းဆုံးရလဒ်များအတွက် 10-15 မိနစ် လိုအပ်သည်။

Ethanol fixation သည် ဆဲလ်လည်ပတ်မှုအဆင့်များကို ထိန်းသိမ်းရန်အတွက် စံပြဖြစ်ပြီး ၎င်းကို ဆဲလ်လည်ပတ်မှုဆန်းစစ်ခြင်းအတွက် propidium iodide (PI) ကဲ့သို့သော DNA-binding dyes နှင့် ပေါင်းစပ်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။

Methanol Fixation

Methanol သည် အထူးသဖြင့် အတွင်းဆဲလ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက် အသုံးများသော fixative တစ်မျိုးဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် ဆဲလ်အမြှေးပါးကို ထိုးဖောက်ဝင်ရောက်ပြီး ဆဲလ်အတွင်းပိုင်းဖွဲ့စည်းပုံများကို တည်ငြိမ်စေခြင်းဖြင့် လုပ်ဆောင်သည်။ မီသနောသည် ဆယ်လူလာပရိုတင်းများနှင့် အန်တီဂျန်များကို ထိန်းသိမ်းရာတွင် ထိရောက်မှုရှိသော်လည်း၊ ၎င်းသည် ဆဲလ်အရွယ်အစားနှင့် ပုံသဏ္ဍာန်ဆိုင်ရာ အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုချက်များကို သက်ရောက်မှုရှိနိုင်သည့် ဆဲလ်ကျုံ့မှုကို ဖြစ်စေနိုင်သည်။

အကြံပြုချက်-

● အာရုံစူးစိုက်မှု- ပုံမှန်အားဖြင့် 90-100% မီသနောကို အသုံးပြုသည်။

● ပြုပြင်ချိန်- ၁၀-၁၅ မိနစ်သည် များသောအားဖြင့် လုံလောက်သည်။

အထူးသဖြင့် cytoplasm သို့မဟုတ် nucleus အတွင်းရှိ အမှတ်အသားများကို စစ်ဆေးသောအခါ အတွင်းဆဲလ်အတွင်း ပရိုတင်းများကို လေ့လာသောအခါတွင် Methanol fixation ကို မကြာခဏ အသုံးပြုသည်။ သို့သော်လည်း သုတေသီများသည် methanol fixation ကိုအသုံးပြုသောအခါ ဆဲလ်များကျုံ့သွားနိုင်သည့် အလားအလာကို စဉ်းစားသင့်သည်။

အခြား Fixatives (ဥပမာ Formalin)၊

ရေတွင်ဖော်မယ်လ်ဒီဟိုက်၏ဖြေရှင်းချက်ဖြစ်သော Formalin သည် PFA ထက်သာလွန်သော်လည်း Flow cytometry တွင်အသုံးပြုသည့်နောက်ထပ် fixative ဖြစ်သည်။ Formalin ကို histology နှင့် immunohistochemistry တို့တွင် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုကြပြီး၊ ၎င်းသည် တစ်သျှူးနမူနာများကို အဏုစကုပ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် ထိထိရောက်ရောက် ထိန်းသိမ်းပေးပါသည်။ ဖော်မလင်သည် ဆဲလ်ဖွဲ့စည်းပုံများကို ထိန်းသိမ်းထားနိုင်သော်လည်း၊ ပုံသေတစ်ရှူးနမူနာများနှင့် အလုပ်မလုပ်ပါက ယေဘုယျအားဖြင့် ၎င်းသည် ဆဲလ်အမျိုးအစားခွဲခြင်းနှင့် fluorescence အချို့ကို အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေနိုင်သောကြောင့် ယေဘုယျအားဖြင့် ၎င်းကို flow cytometry အတွက် မထောက်ခံပါ။ Formalin fixation သည် တစ်သျှူးနမူနာများအတွက် အကောင်းဆုံးဖြစ်ပြီး ဆဲလ်တစ်ခုချင်းစီအတွက် မဟုတ်ပါ။

 

ပုံသေ	အာရုံစူးစိုက်မှု	ပြုပြင်ချိန်	အကြံပြုထားသော အသုံးပြုမှု
Paraformaldehyde (PFA)	2-4%	15-30 မိနစ်	ဆဲလ်မျက်နှာပြင် အမှတ်အသားများကို ထိန်းသိမ်းရန် စံပြ၊ immunophenotyping အတွက် အဖြစ်များသည်။
အီသနော	70-100%	10-15 မိနစ်	DNA အကြောင်းအရာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် ဆဲလ်လည်ပတ်လေ့လာမှုများအတွက် အကောင်းဆုံး
မီသနော	90-100%	10-15 မိနစ်	အတွင်းဆဲလ်ပရိုတိန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက်သင့်လျော်သော; ဆဲလ်ကျုံ့ခြင်းကို ဖြစ်စေနိုင်သည်။
ဖော်မလင်	10% (ဖော်မယ်လ်ဒီဟိုက်)	ကွဲပြားသည် (တစ်ရှူးပေါ် မူတည်)	ယေဘုယျအားဖြင့် ဆဲလ်တစ်ခုချင်းစီအတွက်မဟုတ်ဘဲ ပုံသေတစ်ရှူးနမူနာများအတွက် အသုံးပြုသည်။

 

Flow Cytometry အတွက် ဆဲလ်များကို ပြုပြင်ရန် အဆင့်ဆင့်လမ်းညွှန်

ဆဲလ်နမူနာကို ပြင်ဆင်ခြင်း။

ပြုပြင်ခြင်းမပြုမီ၊ တစ်ရှူးများ သို့မဟုတ် သွေးနမူနာများမှ ဆဲလ်များကို ခွဲထုတ်ရန် လိုအပ်ပါသည်။ Centrifugation သည် suspension တစ်ခုအတွင်း ဆဲလ်များကို အာရုံစူးစိုက်မှုပြုလုပ်ရန် အသုံးအများဆုံးနည်းလမ်းဖြစ်သည်။ ဆဲလ်များကို သေချာစွာဆေးကြောရန် အရေးကြီးပြီး ပြုပြင်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်ကို အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေနိုင်သည့် ယဉ်ကျေးမှုမီဒီယာ သို့မဟုတ် ကျန်နေသော ညစ်ညမ်းမှုများကို ဖယ်ရှားရန်လည်း အရေးကြီးပါသည်။

 

1. ဆဲလ်အထီးကျန်ခြင်း- စိတ်ဝင်စားသောဆဲလ်များကိုခွဲရန် centrifugation သို့မဟုတ် cell sorting ကဲ့သို့သော စံအထီးကျန်နည်းလမ်းများကို အသုံးပြုပါ။

2. ဆေးကြောခြင်း- ဆဲလ်များကို ဖော့စဖိတ်ဆားရည် (PBS) ဖြင့် ဆေးကြောပါ။ ပြုပြင်ခြင်း လုပ်ငန်းစဉ်ကို ထိခိုက်စေနိုင်သော အကြွင်းအကျန်များနှင့် အညစ်အကြေးများကို ဖယ်ရှားပါ။

Fixation လုပ်ထုံးလုပ်နည်း

ဆဲလ်များကိုပြင်ဆင်ပြီးသည်နှင့်၊ နောက်တစ်ဆင့်မှာ ဆဲလ်ဆိုင်းထိန်းစနစ်တွင် fixative ကိုထည့်ရန်ဖြစ်သည်။ flow cytometry အတွက် အသုံးအများဆုံး fixative သည် 2-4% PFA ဖြေရှင်းချက်ဖြစ်သည်။

1. ၎င်းကို ကောင်းမွန်စွာရောစပ်ကြောင်း သေချာစေရန် ဆဲလ်ဆိုင်းထိန်းစနစ်တွင် fixative ကိုထည့်ပါ။

2. ဆဲလ်များကို 2-8°C တွင် 15-30 မိနစ်ကြာ ပေါင်းထည့်ပါ။

3. ပေါက်ဖွားပြီးနောက် ဆဲလ်များကို PBS ဖြင့် နှစ်ကြိမ်ဆေးကြောပါ။

Post-Fixation အဆင့်များ

ပြုပြင်ပြီးနောက်၊ ဆဲလ်များကိုဂရုတစိုက်ကိုင်တွယ်ရမည်။ ထပ်မံခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် လိုအပ်ပါက ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းမပြုမီ ဆဲလ်များကို စွန်းထင်းစေသင့်သည်။ နောင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် ဆဲလ်များကို သိမ်းဆည်းရန် သင်စီစဉ်ထားပါက ၎င်းတို့ကို သင့်လျော်သောကြားခံတစ်ခုတွင် ပြန်လည်ရပ်ပြီး 2-8°C တွင် သိမ်းဆည်းပါ။ ပြုပြင်မှုလွန်ကဲခြင်းသည် autofluorescence တိုးမြင့်လာပြီး အချက်ပြအရည်အသွေးကို လျော့ကျစေသောကြောင့် ဆဲလ်များကို fixative တွင် ကြာရှည်စွာထားခဲ့ခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။

 

Flow Cytometry တွင် အကောင်းဆုံး Fixation အတွက် အကြံပြုချက်များ

Over-Fixation ကို ရှောင်ပါ။

ဆဲလ်များသည် fixative နှင့် ကြာရှည်စွာ ထိတွေ့မိသောအခါ လွန်လွန်ကဲကဲ ဖြစ်တည်လာသောအခါ၊ ယင်းသည် ဆဲလ်လူလာပရိုတိန်းများ၏ အလွန်အကျွံချိတ်ဆက်မှုကို ဖြစ်ပေါ်စေပြီး ဒေတာအရည်အသွေးကို ထိခိုက်စေနိုင်သည်။ ၎င်းသည် အော်တိုဖျော့ဖျော့ဖျော့ဖျော့၊ ပဋိပစ္စည်းချိတ်တွယ်မှု လျှော့ချခြင်းနှင့် မမှန်ကန်သော စီးဆင်းမှု ဆိုက်တိုမက်ထရီ တိုင်းတာခြင်းတို့ကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်။ လွန်ကဲစွာ ပြုပြင်ခြင်းကို ရှောင်ရှားရန်အတွက် သင်၏ သီးခြားဆဲလ်အမျိုးအစားနှင့် စမ်းသပ်မှုများအတွက် အကြံပြုထားသည့် ပြင်ဆင်ချိန်များကို အမြဲစစ်ဆေးပါ။

Fixation Time နှင့် နမူနာအမျိုးအစား

ဆဲလ်အမျိုးအစားနှင့် စမ်းသပ်မှု၏ သဘောသဘာဝပေါ်မူတည်၍ အကောင်းဆုံးပြင်ဆင်မှုအချိန်သည် ကွဲပြားနိုင်သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ ကိုယ်ခံအားဆဲလ်များသည် တစ်ရှူးနမူနာများထက် ပြုပြင်ချိန်ပိုတိုတောင်းနိုင်သည်။ နမူနာအမျိုးအစား၏ သီးခြားလိုအပ်ချက်များအပေါ် အခြေခံ၍ ပြင်ဆင်ချိန်ကို ချိန်ညှိပါ။ မျက်နှာပြင်ပရိုတိန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက်၊ တိုတောင်းသော fixation အချိန် (10-15 မိနစ်) သည်ပုံမှန်အားဖြင့်လုံလောက်သည်။ အတွင်းဆဲလ်များ စွန်းထင်းခြင်း သို့မဟုတ် DNA ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက်၊ ပြုပြင်ရန်အချိန်ပိုလိုအပ်ပါသည်။

ပြုပြင်ပြီးနောက် စွန်းထင်းခြင်း။

ဆဲလ်များကိုပြုပြင်ပြီးနောက်၊ ပဋိပစ္စည်းများ သို့မဟုတ် ချောင်းဆိုးဆေးများဖြင့် စွန်းထင်းခြင်းသည် flow cytometry ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် အရေးကြီးသောအဆင့်တစ်ခုဖြစ်သည်။ အချို့သော ချောင်းဆိုးဆေးများ၊ အထူးသဖြင့် တွဲဆိုးဆေးများသည် ပြုပြင်ရန် အာရုံခံနိုင်ပြီး ဆဲလ်များ ပုံသေလွန်သွားပါက ပျက်စီးသွားနိုင်သည်။ အကောင်းဆုံးသော စွန်းထင်းမှုရလဒ်များအတွက်၊ ဖြစ်နိုင်သည့်အခါတိုင်း မပြုပြင်မီ ဆဲလ်များကို စွန်းထင်းရန် အကြံပြုထားသည်။ ၎င်းသည် ဆိုးဆေးပျက်စီးခြင်းမှ ကာကွယ်နိုင်ပြီး ပိုမိုအားကောင်းသော fluorescence အချက်ပြမှုများကို သေချာစေနိုင်သည်။

 

Flow Cytometry အတွက် ပုံသေဆဲလ်များကို သိမ်းဆည်းခြင်း။

ကာလတို သိုလှောင်မှု

ရေတိုသိုလှောင်မှုအတွက်၊ ပုံသေဆဲလ်များကို ရေခဲသေတ္တာတွင် 2-8°C တွင် သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။ ပြုပြင်ပြီးနောက် တစ်ရက် သို့မဟုတ် နှစ်ရက်အတွင်း ဆဲလ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် စီစဉ်သည့်အခါ ၎င်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။ ရောင်ရမ်းမှုဆိုင်ရာ အချက်ပြမှုများကို ထိခိုက်စေနိုင်သော photobleaching ကိုကာကွယ်ရန် အမှောင်ထဲတွင် ပုံသေဆဲလ်များကို အမြဲသိမ်းဆည်းပါ။

ရေရှည်သိုလှောင်မှု

ရေရှည်သိုလှောင်မှုအတွက်၊ ဆဲလ်များကို cryopreservation media တွင် အေးခဲစေနိုင်သည်။ ပုံမှန် cryopreservation medium တွင် 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) နှင့် 90% fetal bovine serum (FBS) တို့ ပါဝင်ပါသည်။ သို့သော်လည်း၊ mFreSR™ သို့မဟုတ် CryoStor™ CS10 ကဲ့သို့ သွေးရည်ကြည်ကင်းစင်သော cryopreservation ဖြေရှင်းနည်းများကို FBS နှင့် ဆက်စပ်သည့် ပြဿနာများကို ရှောင်ရှားရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။ ရေခဲပုံဆောင်ခဲများ ဖြစ်ပေါ်ခြင်းကို တားဆီးရန်အတွက်၊ ဆဲလ်များကို အေးခဲစေရန် ထိန်းချုပ်ထားသော အဆင့်ရေခဲသေတ္တာကို အသုံးပြုပါ။ ၎င်းသည် ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို ထိန်းသိမ်းရန် ကူညီပေးပြီး သင့်လျော်သော သိုလှောင်မှုကို သေချာစေသည်။

 

Flow Cytometry အတွက် Cell Fixation တွင် ရှောင်ကြဉ်ရမည့် ဘုံအခက်အခဲများ

မသင့်လျော်သော Fixation ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုများ

မှားယွင်းစွာ ပြုပြင်ခြင်းသည် autofluorescence၊ antibody binding လျော့နည်းခြင်းနှင့် ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း အားနည်းခြင်း အပါအဝင် ပြဿနာများစွာကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်။ ဤပြဿနာများသည် flow cytometry ရလဒ်များ၏ တိကျမှုနှင့် ယုံကြည်စိတ်ချရမှုကို သိသိသာသာ ထိခိုက်စေနိုင်သည်။ သင်၏ သီးခြားနမူနာအမျိုးအစားအတွက် ပြုပြင်ခြင်းဆိုင်ရာ ပရိုတိုကောများကို အမြဲတမ်းစစ်ဆေးပြီး ဆဲလ်အမျိုးအစားနှင့် အမှတ်အသားများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသည့်အတွက် ပြုပြင်ခြင်းအခြေအနေများသည် သင့်လျော်ကြောင်း သေချာပါစေ။

သင့်လျှောက်လွှာအတွက် မှန်ကန်သော Fixative ကိုရွေးချယ်ပါ။

သင်၏ flow cytometry စမ်းသပ်မှုအတွက် သင့်လျော်သော fixative ကိုရွေးချယ်ခြင်းသည် ယုံကြည်စိတ်ချရပြီး တိကျသောရလဒ်များရရှိရန်အတွက် အရေးကြီးပါသည်။ မတူညီသော fixative များသည် မတူညီသော application များအတွက် ပိုသင့်တော်ပါသည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ PFA သည် မျက်နှာပြင်ပရိုတိန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက် အသုံးများပြီး အီသနောသည် DNA အခြေပြုလေ့လာမှုများအတွက် စံပြဖြစ်သော်လည်း၊ စမ်းသပ်မှုမစတင်မီ၊ သင်၏ သီးခြားအသုံးချပရိုဂရမ်အတွက် အကောင်းဆုံး fixative ကို ရှာဖွေပြီး fixation protocol ကို လျော်ညီစွာ ချိန်ညှိပါ။

 

နိဂုံး

အောင်မြင်သော flow cytometry ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုရရှိရန်အတွက် မှန်ကန်သောဆဲလ်များကို ပြုပြင်ခြင်းသည် မရှိမဖြစ်လိုအပ်ပါသည်။ ၎င်းသည် ဆဲလ်ဖွဲ့စည်းပုံများကို ထိန်းသိမ်းရန် ကူညီပေးပြီး ပရိုတင်းများနှင့် DNA များ၏ ခိုင်မာမှုကို သေချာစေသည်။ သင့်လျော်သော fixation protocols များကို လိုက်နာပြီး over-fixation ကိုရှောင်ကြဉ်ခြင်းဖြင့်၊ သုတေသီများသည် data တိကျမှုနှင့် ယုံကြည်စိတ်ချရမှုကို မြှင့်တင်နိုင်ပါသည်။ သင့်စမ်းသပ်မှုအတွက် သင့်လျော်သော fixative ကိုရွေးချယ်ခြင်းသည် သင့်ရလဒ်များ၏ အလုံးစုံအရည်အသွေးကို တိုးတက်စေသည်။ ဤအကောင်းဆုံးအလေ့အကျင့်များကို အကောင်အထည်ဖော်ခြင်းဖြင့် သင်၏စီးဆင်းမှု cytometry ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုသည် ဆဲလ်လူလာလုပ်ငန်းဆောင်တာများဆီသို့ တသမတ်တည်း ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်သော ထိုးထွင်းသိမြင်မှုများကို ပံ့ပိုးပေးကြောင်း သေချာစေပါသည်။

 

သင့်လျော်သောဆဲလ်ပြုပြင်ခြင်းသည် flow cytometry နှင့် ထုတ်ကုန်များမှ အဓိကအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ပါသည်။ HKeybio သည် ယုံကြည်စိတ်ချရသော ဖြေရှင်းနည်းများကို ပေးဆောင်သည်။ ၎င်းတို့၏ကမ်းလှမ်းချက်များသည် အရည်အသွေးမြင့်ရလဒ်များကို သေချာစေပြီး တိကျသောဆဲလ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် ကမ္ဘာတစ်ဝှမ်းရှိ သုတေသီများက ယုံကြည်ကြသည်။

 

အမြဲမေးလေ့ရှိသောမေးခွန်းများ

မေး- flow cytometry တွင် ဆဲလ်များကို ပြုပြင်ခြင်း၏ အရေးပါမှုကား အဘယ်နည်း။

A- Cell fixation သည် flow cytometry တွင် အရေးပါသောကြောင့် ၎င်းသည် ဆယ်လူလာတည်ဆောက်ပုံများကို ထိန်းသိမ်းကာ တိကျသောခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် ပရိုတင်းများနှင့် DNA ၏ခိုင်မာမှုကိုသေချာစေသည်။

မေး- flow cytometry အတွက် ဆဲလ်များကို မည်မျှကြာအောင် ပြုပြင်သင့်သနည်း။

A- ဆဲလ်များကို ပုံမှန်အားဖြင့် 2-4% paraformaldehyde (PFA) ဖြေရှင်းချက်ဖြင့် 15-30 မိနစ်ကြာ ပြုပြင်သင့်သည်။

မေး- flow cytometry တွင် ဆဲလ်များကို ပြုပြင်ရန်အတွက် အီသနောကို သုံးနိုင်ပါသလား။

A- ဟုတ်ပါသည်၊ အထူးသဖြင့် ဆဲလ်လည်ပတ်လေ့လာမှုများအတွက်၊ အထူးသဖြင့် ဆဲလ်လည်ပတ်မှုလေ့လာမှုများအတွက် DNA အကြောင်းအရာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် အများအားဖြင့် အသုံးပြုသည်။

မေး- ဆဲလ်များသည် flow cytometry တွင် ပုံသေလွန်သွားပါက ဘာဖြစ်နိုင်သနည်း။

A- ပြုပြင်မှုလွန်ကဲခြင်းသည် အလွန်အကျွံ အပြန်အလှန်ချိတ်ဆက်ခြင်းကို ဖြစ်စေနိုင်ပြီး၊ autofluorescence နှင့် အားနည်းသော antibody binding ကိုဖြစ်စေပြီး flow cytometry ရလဒ်များကို ထိခိုက်စေနိုင်သည်။